[發明專利]一種測定黃芪多糖的單糖組成的方法

在審

• 申請號: 201710984988.3
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN107884486A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 楊鴻;王少杰;鄧樺;張勇軍;巴娟
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 王國標

1.一種測定黃芪多糖的單糖組成的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備黃芪多糖水解樣品：取黃芪精制多糖與2mol/L的三氟乙酸溶液混合后于90℃下水浴處理10h，用4mol/L的氫氧化鈉溶液中和至中性，離心去上清液得黃芪多糖水解樣品，備用；

2)制備混合單糖標準品：取D-甘露糖、鼠李糖、D-葡萄糖、D-核糖、D-半乳糖醛酸、D-半乳糖和阿拉伯糖共溶于水得混合單糖標準品，備用；

3)柱前衍生化處理：分別將步驟1)所得黃芪多糖水解樣品和步驟2)所得混合單糖水解標準品與0.5mol/L的PMP甲醇溶液及0.3mol/L的NaOH溶液混合，充分振搖，75℃水浴條件下反應35min，后冷卻至室溫，加入0.3mol/L的鹽酸進行中和，再加入氯仿進行萃取，離心，棄去有機層，重復萃取2～3次，得上層水液，經0.22μm微孔濾膜過濾，分別得黃芪多糖衍生化處理溶液和混合單糖衍生化處理溶液，備用；

4)高效液相色譜法分析：通過高效液相色譜法分別對步驟3)所得的黃芪多糖衍生化處理溶液和混合單糖衍生化處理溶液的色譜圖進行對比及分析，確定黃芪多糖的單糖組成及其含量。

2.根據權利要求1所述的一種測定黃芪多糖的單糖組成的方法，其特征在于：步驟1)中所述的黃芪精制多糖為黃芪粗多糖經大孔樹脂純化濃縮后經真空冷凍干燥所得。

3.根據權利要求2所述的一種測定黃芪多糖的單糖組成的方法，其特征在于：步驟1)中所述黃芪粗多糖為取藥用黃芪按料液重量比為1：16、浸提時間3h、浸提溫度90℃、提取次數2次，后經抽濾、濃縮提取液，無水乙醇沉淀濃縮10h，取沉淀物經真空干燥所得。

4.根據權利要求1所述的一種測定黃芪多糖的單糖組成的方法，其特征在于：步驟4)中高效液相色譜法是將所述黃芪多糖衍生化處理溶液和混合單糖衍生化處理溶液分別經色譜柱分離，用磷酸鹽緩沖溶液與乙腈溶液按重量份比為85：15的混合液進行洗脫，控制柱溫40℃，流速1mL/min，進樣量20μL檢測波長254nm。