[發明專利]一種獲得高純度腺相關病毒載體的純化工藝

在審

• 申請號: 201710974674.5
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN107630037A
• 公開（公告）日: 2018-01-26
• 發明（設計）人: 潘謳東;韋厚良;王立輝;胡惠忠;張立明;由慶睿;賈國棟
• 申請（專利權）人: 和元生物技術（上海）股份有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種大規模獲得高純度腺相關病毒載體的工藝方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟A：收集腺相關病毒載體的細胞培養上清，除去細胞碎片，澄清后的樣品用于層析純化；

步驟B：通過陽離子柱對腺相關病毒載體進行捕獲和初步純化；

步驟C：通過吸附凝膠過濾柱進行中度純化；

步驟D：用陰離子交換柱進行精純；

步驟E：將收集的腺相關病毒載體液加入超濾系統進行濃縮。

2.權利要求1的方法，其特征在于，所述步驟A中的細胞培養上清包括微載體細胞培養上清、貼壁培養上清和懸浮細胞培養上清。

3.權利要求1的方法，其特征在于，所述步驟A中采用離心或20-0.1 μm的深層過濾除去細胞碎片，再用0.22-0.45 μm濾器過濾。

4.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟B中，陽離子交換層析介質的配基為Sulphopropyl (SP)的強陽離子交換基團。

5.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟B中，陽離子交換層析的平衡緩沖液為電導在5-10 mS/cm、pH 5-7范圍內。

6.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟B中，陽離子交換層析的洗脫緩沖液為電導在5-40 mS/cm、pH 5-9范圍內。

7.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟C中，層析介質具有體積排阻和吸附雙重功能的多模式介質。

8.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟C中，層析介質的體積排阻尺寸在50 kDa至700 kD之間。

9.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟C中，平衡緩沖液為電導在5-40 mS/cm、pH 5-9范圍內。

10.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟D中，層析介質的配基為Quaternary ammonium (Q)的強陰離子交換基團。

11.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟D中，陰離子交換層析的平衡緩沖液為電導在5-10 mS/cm、pH 7-9范圍內。

12.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟D中，陰離子交換層析的洗脫緩沖液為電導在10 -100 mS/cm、pH 7-9范圍內。

13.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟E中，超濾膜的排阻尺寸在30 kDa至300 kD之間。

14.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟E中，超濾模式包括離心濃縮和切向流過濾。

15.權利要求1的方法，其特征在于所述步驟E中，超濾膜的形式包括中空纖維超濾膜和平板超濾膜。

16.前述權利要求任一項方法，其用于純化2型腺相關病毒載體。