[發明專利]一種16種真菌毒素的檢測方法

在審

• 申請號: 201710962968.6
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107741462A
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 符金華;楊琳芬;董澤民;徐國茂;邢磊;姜文娟;尹騰桂;李勇;李俊;金海紅;李瑾瑾;王亮;鄧宇
• 申請（專利權）人: 江西省獸藥飼料監察所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/16
• 代理公司: 江西省專利事務所36100
• 代理人: 胡里程

1.一種16種真菌毒素的檢測方法，其步驟：

(1)提取：準確稱取精確到0.01g的樣品5g于50mL離心管中，加入20mL乙腈-水-乙酸混合液的提取液，混合液三種液體體積比70:29:1，渦旋或振蕩提取30min，然后以6000r/min離心10min，吸取0.5mL上清液于1.5mL離心管中，加入0.5mL水并渦旋混勻，在4℃下以12000r/min離心10min，上清液過0.2μm的聚四氟乙烯濾膜，收集得樣品濾液A；

(2)加入穩定同位素：分別準確吸取180uL濾液A和16種真菌毒素混合標準溶液于不同的400uL內插管中，加入20uL 14種真菌毒素穩定同位素混合工作液渦旋混勻后，得到含有14種真菌毒素穩定同位素內標的16種真菌毒素混合標準溶液和含有14種真菌毒素穩定同位素內標的樣品待測液；

16種真菌毒素混合標準溶液見表一；

14種真菌毒素穩定同位素混合工作液見表二；

表一 16種真菌毒素混合標準溶液

表二 14種真菌毒素穩定同位素混合工作液濃度

(3)將上步中得到的含有14種真菌毒素穩定同位素內標的16種真菌毒素混合標準溶液和含有14種真菌毒素穩定同位素內標的樣品待測液依次注入液相色譜-串聯質譜系統，進行檢測，即得到最終結果。

2.根據權利要求1所述一種16種真菌毒素的檢測方法，其特征在于：該方法采用液相色譜-串聯質譜法能同時測定飼料及飼料原料中黃曲霉毒素B₁/B₂/G₁/G₂、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷、3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬毒素B₁/B₂、T-2/HT-2、雜色曲霉毒素16種真菌毒素。

3.根據權利要求1所述一種16種真菌毒素的檢測方法，其特征在于：該方法采用液相色譜-串聯質譜法能同時定性定量測定飼料及飼料原料中黃曲霉毒素B₁/B₂/G₁/G₂、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇-3-葡萄糖苷、3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、15-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、伏馬毒素B₁/B₂、T-2/HT-2、雜色曲霉毒素16種真菌毒素；

定性方法：用液相色譜-質譜條件測定樣品，如果檢測的色譜峰保留時間與標準品一致，允許偏差小于±2.5％；定性離子與定量離子的相對豐度與濃度相當的標準工作液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表三規定，則可判斷樣品中存在被測物；

表三定性確證相對離子豐度的最大允許偏差

定量測定：用液相色譜-質譜條件測定樣品，將配制含有同位素內標的標準系列工作溶液按濃度從低到高依次注入液相色譜-串聯質譜聯用儀，待儀器條件穩定后,以目標物質和內標的濃度比為橫坐標設為x軸)，目標物質和內標的峰面積比為縱坐標設為y軸，對各個數值點進行最小二乘線性擬合,標準工作曲線按式(1)計算：

y＝ax+b…………………………(1)

式中:

y——目標物質/內標的峰面積比；

a——回歸曲線的斜率；

x——目標物質/內標的濃度比；

b——回歸曲線的截距；

含有14種真菌毒素穩定同位素內標的16種真菌毒素混合標準溶液和含有14種真菌毒素穩定同位素內標的樣品待測液的響應值均應在儀器線性響應范圍內。

4.根據權利要求1或3所述一種16種真菌毒素的檢測方法，其特征在于：用液相色譜-串聯質譜測定，采用內標法定量；16種真菌毒素的質譜條件，見表四表四 16種真菌毒素的質譜條件

。