[發(fā)明專(zhuān)利]一種抽葶大青的組織培養(yǎng)與離體再生方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710961825.3
• 申請(qǐng)日: 2017-10-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107616092B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧國(guó)賓;王連春;楊燕;張媛;蔡光輝;胡鵬飛;周炳江
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西南林業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 昆明盈正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 53208
• 代理人: 徐洪剛

本發(fā)明是一種抽葶大青的組織培養(yǎng)與離體再生方法，包括外植體的選擇與消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的分化誘導(dǎo)以及壯苗生根等步驟。本發(fā)明以抽葶大青幼苗葉片為外植體，首次對(duì)抽葶大青的組織培養(yǎng)體系進(jìn)行了探索，確立了無(wú)菌材料的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的分化誘導(dǎo)、壯苗與生根等理想培養(yǎng)條件，最終成功建立了抽葶大青的無(wú)性繁殖體系，對(duì)抽葶大青藥材資源的充分利用、遺傳改良及無(wú)性系苗木的培育等提供一定的理論與技術(shù)依據(jù)。本發(fā)明的培養(yǎng)方法優(yōu)點(diǎn)在于愈傷組織的誘導(dǎo)與不定芽的分化一步完成，操作簡(jiǎn)單，節(jié)省工作量的同時(shí)大大縮短培養(yǎng)的時(shí)間，可以在短時(shí)間里生產(chǎn)大量組培苗，不僅繁殖率高，而且苗的質(zhì)量好，適合工廠化生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抽葶大青的組織培養(yǎng)與離體再生方法。

背景技術(shù)

抽葶大青(Clerodendrum subscaposum)系馬鞭草科大青屬多年生落葉或常綠灌木，全株入藥，其花可安神、止血，主治心悸失眠、痔瘡出血；葉能祛風(fēng)散瘀、解毒消腫，主治偏頭痛、跌打瘀腫、癰腫瘡毒；根、莖可清肺熱、利小便、涼血止血，臨床用于肺熱咳嗽、熱淋、小便不利、咳血、尿血、痔瘡出血、風(fēng)濕骨痛的治療。

抽葶大青莖直立，不分枝或少分枝，小枝四棱形。葉交互對(duì)生，薄革質(zhì)，具長(zhǎng)柄，葉片心形或卵圓形，頂端驟尖或漸尖，基部心形，邊緣具細(xì)齒，葉面散生小粗伏毛。總狀圓錐花序頂生，向一側(cè)偏斜。花小，但花絲長(zhǎng)；花萼、花冠、花梗均,為鮮艷的深紅色，花期長(zhǎng)，核果近球形，熟時(shí)藍(lán)黑色，外包以紅色宿萼；花、果期5-11月。

性喜高溫、濕潤(rùn)、半蔭蔽的氣候環(huán)境，喜土層深厚的酸性土壤，耐蔭蔽，耐瘠薄，忌干旱，忌澇，畏寒冷，生長(zhǎng)適溫為23～30℃。主要產(chǎn)于我國(guó)江蘇、浙江南部、江西南部、湖南、福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、四川、貴州和云南；印度東北、孟加拉、錫金、不丹、中南半島、馬來(lái)西亞、日本也有分布，常生于平原、山谷、溪邊或疏林中或栽培于庭園。

查閱相關(guān)文獻(xiàn)，抽葶大青通過(guò)組織培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)快繁的相關(guān)方法仍未見(jiàn)報(bào)告，因此，急需探索一種能實(shí)現(xiàn)快速繁殖的方法以滿(mǎn)足現(xiàn)代生產(chǎn)的需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抽葶大青的組織培養(yǎng)與離體再生方法，以抽葶大青葉片為外植體，通過(guò)實(shí)驗(yàn)探索，首次建立起抽葶大青的組培快繁體系，為抽葶大青藥用資源的充分利用提供了一定理論和技術(shù)依據(jù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種抽葶大青的組織培養(yǎng)與離體再生方法，包括如下順序的步驟：

(1)外植體的選擇與消毒：選擇抽葶大青幼苗葉片為外植體，洗凈泥土，放入燒杯中，加入水和少量洗衣粉，輕輕搖晃5min，再用清水沖洗2h，將洗衣粉沖洗干凈；最后轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)上，用75％(v/v)的乙醇溶液消毒3-5s，無(wú)菌水洗2次，利用0.1％的含有吐溫的升汞溶液消毒4-5min，無(wú)菌水洗5-6次備用；

(2)愈傷組織的誘導(dǎo)：在無(wú)菌操作下，將消毒好的葉片剪成面積為1-1.5cm²片狀，以葉片正面向上的方式平放接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，溫度23±2℃、空氣相對(duì)濕度50％-60％、光照強(qiáng)度2000Lx、光照時(shí)間12小時(shí)/天培養(yǎng)20天，使葉片切口處均長(zhǎng)出2-6mm厚的一圈致密型、淡綠色、塊狀愈傷組織；

(3)不定芽的分化：愈傷組織繼續(xù)在上述培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)約10-12天，使愈傷組織上分化出深綠色、狀態(tài)正常、數(shù)量極多的小芽；

(4)芽的壯苗培養(yǎng)：分化出的不定芽連同愈傷組織及時(shí)切下，接入壯苗培養(yǎng)基中，溫度23±2℃、空氣相對(duì)濕度50％-60％、光照強(qiáng)度2000Lx、光照時(shí)間12小時(shí)/天，培養(yǎng)天數(shù)25-30天使苗高為3-5cm；

(5)生根培養(yǎng)：將步驟(4)培壯后的小苗單株切下，接入生根培養(yǎng)基中，溫度23±2℃、空氣相對(duì)濕度50％-60％、光照強(qiáng)度2000Lx、光照時(shí)間12小時(shí)/天，培養(yǎng)20-30天使幼苗生長(zhǎng)3-4條、長(zhǎng)度為2-4cm的不定根。