[發明專利]一種微衛星不穩定檢測的方法

在審

• 申請號: 201710961022.8
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107475442A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 張云靜;李威;張中娜
• 申請（專利權）人: 生工生物工程（上海）股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 劉書芝

技術領域

本發明涉及分子診斷領域，具體而言，涉及一種微衛星不穩定檢測的方法。

背景技術

結直腸癌(carcinoma of colon and rectum，CRC)是一種常見的嚴重危害人類健康的惡性腫瘤。隨著人類社會的發展，人們的生活方式和生存環境發生了改變，生活壓力日益增大，生存環境的污染日益嚴重，致使近年來結直腸癌的發病率呈現明顯的上升趨勢，而且發病年齡呈現年輕化態勢。遺傳性結直腸癌在結直腸癌體系中占重要比例，其具有遺傳性、高發性、多發性和腫瘤發生的多器官性等特征，臨床上依據有無多發性息肉病，將遺傳性結直腸癌分為遺傳性息肉病和遺傳性非息肉病性結直腸癌(HNPCC)兩大類，兩類遺傳性結直腸癌皆為常染色體顯性遺傳。據報道，遺傳性非息肉病性結直腸癌約占結直腸癌的15％左右。

結直腸癌從發生機制上分為染色體不穩定和微衛星不穩定兩種類型。微衛星是遍布人類基因組中的短串聯重復序列。微衛星不穩定(Microsatellite Instability，MSI)是指由于缺失或插入重復單位引起腫瘤的DNA與同一個體的正常胚系DNA相比微衛星長度發生改變，即產生異常長度的等位基因。研究表明，15％結直腸癌是經MSI途徑發生，MSI是由于錯配修復基因發生缺陷引起，而遺傳性非息肉性大腸癌(HNPCC)是由錯配修復基因胚系突變所致的顯性遺傳病，90％以上的典型HNPCC患者具有MSI特征。另外，也有15％左右的散發性結直腸癌患者具有MSI特征。MSI的HNPCC發生的主要原因是生殖細胞的錯配修復(mismatch repair，MMR)基因突變。hMLHl，hMSH2，hMSH6和hPMS2等任何一個或幾個錯配修復基因的失活都能導致MSI發生，散發結直腸癌病人多數僅有錯配修復基因體細胞突變。

1997年，MSI國際研究合作組織在針對腫瘤的微衛星不穩定及復制錯誤表型檢測的國際會議制定了統一的MSI檢測標準，即Bethesda Guidelines。該標準明確MSI檢測的參考檢測位點，包括兩個單核苷酸重復單元的微衛星位點(BAT-25和BAT-26)和三個二核苷酸重復單元的微衛星位點(D2S123，D5S346和D17S250)。應用本標準檢測腫瘤樣本的MSI狀態時，5個微衛星位點如果檢測出2個或者2個以上的位點發生改變，則被稱為MSI-H型，即高頻度微衛星不穩定，MSI-H型腫瘤表選出特有的臨床及病理學表型。5個微衛星位點如果只檢測出一個位點發生改變，則被稱為MSI-L型，即低頻度微衛星不穩定。5個微衛星位點都沒有發生改變，則被稱為MSS型，即微衛星穩定型。通常，由于MSI-L型和MSS型的臨床表現無明顯差別，所以將MSI-L型劃入MSS型。

MSI結直腸癌與MSS結直腸癌相比，在預后和治療等方面具有顯著的差異，MSI結直腸癌檢測臨床意義包括預后性，預測性和HNPCC的輔助診斷和篩查三個方面。MSI-H II期結直腸癌5年無復發生存率高于MSS II期結直腸癌。即在II期結直腸癌患者中，MSI-H狀態提示良好預后。5-氟尿嘧啶是結直腸癌術后輔助治療的重要化療藥物。MSH-H II期結直腸癌患者有良好的預后但不能從5-氟尿嘧啶治療中獲益。從MSI-H結直腸癌中篩選出來的患者，就個人而言早期診斷和預防性息肉切除術可以降低CRC死亡率。此外，還可以為患者家族成員提供腫瘤預防和篩查。所以臨床上已將MSI作為結直腸癌預后和制定輔助治療方案的重要分子標記物，并協助HNPCC的篩選。在2011年關于結直腸癌篩查的National Comprehensive Cancer Network指南中，已經將MSI檢測列入必要檢測項目。2017年5月，美國食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration，FDA)破天荒宣布“加速批準PD-1抗體用于確定有高頻度微衛星不穩定或者錯配修復基因缺陷的成人和兒童晚期或者轉移性實體腫瘤患者”。FDA批文中明確規定只有高頻度微衛星不穩定或錯配修復基因缺陷的患者才能有較高的概率從PD-1(programmed death 1)抗體中獲益，權威數據表明在用PD-1抗體治療前，先要做MSI檢測，因為只有MSI-H型病人，接受PD-1抗體治療，有效率才比較高，MSS型病人，有效率很低甚至極低。