[發明專利]還原性糖鏈和糖蛋白O-糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化及分離分析方法

有效

• 申請號: 201710954115.8
• 申請日: 2017-10-13
• 公開（公告）號: CN107796889B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 王仲孚;王承健;路宇;黃琳娟;柳人丹;溫婭楠
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安智萃知識產權代理有限公司 61221
• 代理人: 李炳輝

1.還原性糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化方法，具體為還原性糖鏈與氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，在酸性條件發生還原胺化反應，生成具有活性亞甲基的糖鏈衍生物；或在堿性條件下發生邁克爾加成反應，生成具有伯氨基的糖鏈衍生物；

所述還原性糖鏈為游離還原性糖鏈或糖蛋白上釋放的糖鏈，其中，所述游離還原性糖鏈為從植物、動物中提取的還原性糖鏈或合成得到的還原性糖鏈。

2.根據權利要求1所述的還原性糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟(1A)：將還原性糖鏈加入3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與質子型溶劑配制得到的溶液中，所述3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在溶液中的濃度小于1mol/L,所述反應體系中3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與還原性糖鏈的摩爾濃度之比大于或等于10:1；

步驟(2A)：向反應體系中加入有機弱酸，所述有機弱酸在反應體系中的體積百分比為7％～25％，反應體系的pH大于3且小于6，加熱至65℃～75℃，反應1小時～2小時；

步驟(3A)：反應結束后，向步驟(2A)的反應體系中加入氰基硼氫化鈉，所述氰基硼氫化鈉與還原性糖鏈的物質的量之比大于或等于20:1；

步驟(4A)：維持65℃～75℃，反應0.5小時～1小時，后處理得到帶有活性亞甲基的糖鏈衍生物。

3.根據權利要求2所述的還原性糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟(1A)：將還原性糖鏈加入3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與DMF或DMSO配制得到的溶液中，所述3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在溶液中的濃度為0.625mol/L,所述反應體系中3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與還原性糖鏈的摩爾濃度之比為25:1；

步驟(2A)：向反應體系中加入冰醋酸，所述冰醋酸在反應體系中的體積百分比為15％，反應體系的pH大于3且小于6，加熱至70℃，反應2小時；

步驟(3A)：反應結束后，向步驟(2A)的反應體系中加入氰基硼氫化鈉，其中所述氰基硼氫化鈉與還原性糖鏈的物質的量之比為30:1；

步驟(4A)：維持70℃，反應1小時，后處理得到具有活性亞甲基的糖鏈衍生物。

4.根據權利要求1所述的還原性糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟(1B)：將還原性糖鏈加入3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與質子型溶劑配制得到的溶液中，所述3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在溶液中的濃度小于1mol/L,所述反應體系中3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與還原性糖鏈的摩爾濃度之比大于或等于5:2；

步驟(2B)：向反應體系中加入氫氧化鈉或氨水，直至反應體系pH大于9.5，加熱至40℃～70℃，反應1小時～1.5小時；

步驟(3B)：反應結束后，調節反應混合物pH至中性，后處理得到具有伯氨基的糖鏈衍生物。

5.根據權利要求4所述的還原性糖鏈的氨基吡唑啉酮類異二官能團試劑衍生化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟(1B)：將還原性糖鏈加入3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與DMF或DMSO配制得到的溶液中，所述3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮在溶液中的濃度為0.25mol/L～0.75mol/L，所述反應體系中3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮與還原性糖鏈的摩爾濃度之比為3:1；

步驟(2B)：向反應體系中加入氫氧化鈉或氨水，直至反應體系pH＝10，加熱至50℃，反應1.5小時；

步驟(3B)：反應結束后，調節反應混合物pH至中性，后處理得到具有伯氨基的糖鏈衍生物。