[發明專利]南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀的分子標記及應用

有效

• 申請號: 201710940378.3
• 申請日: 2017-10-11
• 公開（公告）號: CN107523636B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 崔健;李鳳梅;張洪亮;梁妍嬌;劉素芹;宋云云;江志訓
• 申請（專利權）人: 青島市農業科學研究院;青島科技大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司 37241
• 代理人: 袁曉玲;郝團代

本發明屬于植物分子標記制備技術領域，具體涉及一種與南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀相關的SNP分子標記的制備與應用，從南瓜砧木中克隆獲得與蠟粉形成相關的硅轉運蛋白CmLsi1基因片段，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，在SEQ ID NO：1的第360bp處有一個C/T的堿基突變，導致PCR?RFLP?HinP1Ⅰ多態性。本發明公開了CmLsi1基因片段的多態性在南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉檢測中的應用，為南瓜砧木去除黃瓜蠟粉性狀標記輔助選擇提供了新的分子標記。

技術領域

本發明屬于植物分子標記制備技術領域，具體涉及一種與南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀相關的SNP分子標記的制備與應用。

背景技術

果實表面蠟粉是黃瓜的重要商品性狀之一。近年來，優質、少蠟粉的黃瓜越來越受消費者的歡迎。研究表明，黃瓜果實蠟粉的形成與硅吸收有一定關系，根系吸收硅能力的越強，可能會導致蠟粉形成的越多(Namiki Mitani，2011)。研究人員將將黃瓜嫁接到去蠟粉的砧木上，發現極少蠟粉砧木嫁接的黃瓜根、莖、葉、果實中硅含量少于多蠟粉砧木嫁接黃瓜和自根黃瓜，尤其以葉片與果實中硅含量差異顯著。硅在黃瓜果實發育過程中含量呈先升高后降低的變化趨勢，花后1～3天的幼果中硅含量最高，商品成熟果實果皮中硅含量明顯高于果肉。由此可知將黃瓜嫁接到去蠟粉的砧木上，可以減少嫁接黃瓜表面的蠟粉。因此篩選合適的砧木是非常關鍵的。

作物對硅(Si)的吸收主要是通過根系細胞中硅轉運蛋白介導的。有蠟粉南瓜砧木硅轉運蛋白(Lsi1)定位在質膜上，無蠟粉南瓜砧木Lsi1保留在內質網上，揭示了保留在內質網上Lsi1未折疊或裝配不當。因此，來自蠟粉南瓜砧木Lsi1可以轉運Si，而無蠟粉南瓜砧木 Lsi1不能轉運硅。兩種類型南瓜砧木的Lsi1，僅將242處的脯氨酸改變為亮氨酸導致Si轉運活性的喪失。在南瓜育種過程中，將攜帶這種Lsi1突變標記的南瓜進行繁殖，培育后代，克隆獲得后代中的Lsi1基因，研究其多態性；研究Lsi1基因標記的遺傳規律及其南瓜砧木去除黃瓜表面蠟粉性狀的關系，從中篩選出含Lsi1基因的標記。在傳統南瓜砧木育種和生產中，在成熟期才能夠判斷蠟粉性狀，不僅選育周期長，而且占地面積大，不能滿足現代農業的快速發展需求，亟需一種既育種時間短，占地面積小，省時省力的育種方法。

發明內容

為了解決現有技術存在的去蠟粉南瓜砧木篩選方式時間長，占地面積大的問題，本發明提供一種與南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀相關的單核苷酸多態性(SNP)分子標記，本發明還提供與南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀相關的SNP分子標記在南瓜砧木育種中的應用，采用本發明的技術在苗期就可以判斷南瓜砧木去除嫁接黃瓜蠟粉性狀，大大節省了育種時間和占地面積。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種與南瓜砧木去除嫁接黃瓜表面蠟粉性狀相關的SNP分子標記，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，即下述序列所示，且第360位的堿基是C或T，導致去黃瓜蠟粉和不去黃瓜蠟粉的多態性；

ATGAGTTCTTCTCAGGATCCTCAGCTTGTTCAACAACAATCCGTTGTGGATGTTGAA GAATTCGTCTCCGTTGAAAACCCCGATTCCAAACGCTCCCAGTTTGGATCGTTGTTCAA AAACCATTACCCTCCTGGCTTTTCCCGGAAGGTACTGTCCTGACCATTATTACTATGTTTC GACAAAACAAAGCCAATTTGAGTATAATTCAGCAGATTAACAGACGTGTTTTGTGTTTTG TGTTTTTTCTTTTATTTTTTTTATTTTTTTTATTTTTTTATTGTAGCTTGTGGCGGAGGTGAT TGCGACGTATTTGCTAGTGTTTGTAACGTGTGGGGCGGCGGCATTGAACGGGAGCGATG YGCAAAGAGTGTCGCAGCTTGGTGCCTCGGTTGCCGGTGGCCTTATTGTGACGGTGATG ATTTATGC