[發明專利]V12CBD蛋白及其編碼基因的一種新用途

有效

• 申請號: 201710935099.8
• 申請日: 2017-10-10
• 公開（公告）號: CN107670023B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 危宏平;楊航
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢病毒研究所
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61P31/04
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明涉及生物制劑領域，公開了一種能結合金黃色葡萄球菌的V12CBD蛋白及其編碼基因的一種新用途。本發明提供的新用途是V12CBD蛋白及其編碼基因在制備治療與預防葡萄球菌感染的藥物中的應用，V12CBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，V12CBD蛋白的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。實驗表明，V12CBD與金黃色葡萄球菌結合后能抑制細菌在上皮細胞的粘附和入侵，增強金黃色葡萄球菌對巨噬細胞的敏感性；V12CBD能活化巨噬細胞，增強機體的免疫功能；預防性注射V12CBD以及包含有V12CBD的融合蛋白質能顯著提高金黃色葡萄球菌感染小鼠的存活率。因此，V12CBD能單獨或者作為添加劑與不同形式的試劑和溶液配伍，用于葡萄球菌的治療與預防性治療，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物制劑領域，具體涉及腸球菌裂解酶PlyV12的細胞壁結合域V12CBD蛋白及其編碼基因的一種新用途。

背景技術

葡萄球菌是一類球形的革蘭氏陽性細菌，能引起人和動物的很多疾病，同時也是醫院感染常見的病原菌之一。由于葡萄球菌的廣泛耐藥性，尤其是耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)的出現和世界范圍的傳播，金黃色葡萄球菌引起的感染已成為院內和社區獲得性感染中的主要致病菌，致死率較高，危害巨大。由于新型抗生素開發的緩慢以及葡萄球菌疫苗的缺乏，針對葡萄球菌發展新型抗菌藥物具有非常重要的意義。金黃色葡萄球菌在上皮細胞的粘附和入侵是其發起感染的第一步，這是在金黃色葡萄球菌表面特異蛋白與宿主上皮細胞之間的相互作用下發生的。巨噬細胞作為機體抵御病原體入侵的第一道防線，會對入侵的病原體進行吞噬和殺滅。但是，金黃色葡萄球菌由于具有特殊的肽聚糖結構以及菌體表面修飾，如莢膜多糖，壁磷壁酸等，能夠逃逸巨噬細胞的免疫清除。因此，金黃色葡萄球菌的免疫逃逸是其感染難治愈和高致死率的幫兇。

噬菌體裂解酶是雙鏈DNA噬菌體感染宿主細菌后晚期表達的一種細胞壁水解酶，用于水解宿主細菌的細胞壁釋放子代噬菌體。裂解酶通常具有模塊化的結構，即包括N-端的催化功能域(CD)和C-端的細胞結合功能域(CBD)。這兩個功能域相對獨立，具有比較明確的功能。之前的研究表明，CD功能域主要體現為肽聚糖水解活性，而CBD功能域則具有與特定把細菌特異性識別的功能。但只具有CBD結合功能的蛋白質對細菌生長和感染的影響迄今為止未見任何報道。

發明內容

本發明的目的是提供腸球菌裂解酶PlyV12的細胞壁結合域V12CBD蛋白及其編碼基因的一種新用途。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

腸球菌裂解酶PlyV12的細胞壁結合域V12CBD蛋白的新用途，所述V12CBD蛋白應用于制備治療與預防葡萄球菌感染的藥物，所述V12CBD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

進一步地，所述V12CBD蛋白的編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，所述V12CBD蛋白通過提高宿主巨噬細胞殺菌能力來預防葡萄球菌感染。

進一步地，所述V12CBD蛋白通過結合葡萄球菌來降低細菌毒力來治療葡萄球菌感染。

進一步地，所述V12CBD蛋白通過與噬菌體裂解酶催化域、抗菌肽和細菌抗原中的任一種或多種氨基酸片段融合成新的蛋白質來預防葡萄球菌感染。

本發明另一方面公開了V12CBD蛋白的制備方法。所述V12CBD蛋白可利用常規的基因工程的制備方法獲得。例如：通過PCR擴增相應的編碼基因序列，經克隆篩選和測序鑒定正確后，利用pET28a(+)質粒構建原核表達載體，將鑒定正確的重組表達載體轉化大腸桿菌BL21(DE3)，篩選獲得陽性轉化子，再以IPTG誘導表達，對以胞內可溶性表達的V12CBD蛋白進行親和層析純化，即得。