[發(fā)明專利]具有自殺基因開(kāi)關(guān)的靶向人間皮素的工程化免疫細(xì)胞

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710916606.3
• 申請(qǐng)日: 2017-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109593721B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹衛(wèi);劉麗萍;何佳平;馬安云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 亙喜生物科技（上海）有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C07K19/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;王正君

本發(fā)明提供了一種靶向間皮素(MSLN)的工程化的免疫細(xì)胞。具體地，本發(fā)明提供了一種靶向間皮素的嵌合抗原受體T細(xì)胞，所述細(xì)胞的CAR結(jié)構(gòu)中包含細(xì)胞自殺元件，并且所述細(xì)胞中的PD1基因表達(dá)是被沉默的。具體地，本發(fā)明的CAR結(jié)構(gòu)中同時(shí)包含CAR基本結(jié)構(gòu)和細(xì)胞自殺元件，二者各自獨(dú)立，其具有相應(yīng)功能互不干擾。此外，本發(fā)明細(xì)胞中的PD1基因表達(dá)被沉默，與所述的CAR結(jié)構(gòu)具有協(xié)同作用，腫瘤殺傷作用增強(qiáng)，不易復(fù)發(fā)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫細(xì)胞治療領(lǐng)域，更具體地涉及一種具有自殺基因開(kāi)關(guān)的靶向人間皮素的工程化免疫細(xì)胞。

背景技術(shù)

細(xì)胞免疫治療是一種新興的、具有顯著療效的腫瘤治療模式，是一種自身免疫抗癌的新型治療方法。它是運(yùn)用生物技術(shù)和生物制劑對(duì)從病人體內(nèi)采集的免疫細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和擴(kuò)增后回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)的方法，來(lái)激發(fā)、增強(qiáng)機(jī)體自身免疫功能，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。

嵌合免疫抗原受體(Chimeric antigen receptors，CARs)由胞外抗原識(shí)別區(qū)域，通常是scFv(single-chain variable fragment)，跨膜區(qū)以及胞內(nèi)共刺激信號(hào)區(qū)域組成。CARs的胞外段可識(shí)別一個(gè)特異的抗原，隨后通過(guò)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)導(dǎo)該信號(hào)，引起T細(xì)胞的活化增殖、細(xì)胞溶解毒性和分泌細(xì)胞因子，進(jìn)而清除靶細(xì)胞。首先分離病人自體T細(xì)胞(或者異源供體)，激活并進(jìn)行基因改造產(chǎn)生CAR-T細(xì)胞，隨后注入同一病人體內(nèi)。這種方式患移植物抗宿主病概率極低，抗原被T細(xì)胞以非MHC限制方式識(shí)別。此外，一種CAR-T就可以治療表達(dá)該抗原的所有癌癥。

CAR-T細(xì)胞治療在血液惡性腫瘤治療中取得了非常高的臨床反應(yīng)率，這樣的高反應(yīng)率是以往任何一種治療手段都無(wú)法達(dá)到的，在世界各引發(fā)了臨床研究的熱潮。但是在實(shí)體腫瘤治療中，Moon等發(fā)現(xiàn)在小鼠中注射meso-cart能夠約束腫瘤的生長(zhǎng)，但是不能治療腫瘤。他們認(rèn)為是腫瘤微環(huán)境中負(fù)調(diào)控因子的上調(diào)導(dǎo)致cart功能的減退，如在腫瘤微環(huán)境中，T細(xì)胞表面PD-1(programmed death protein-1)表達(dá)上調(diào)限制了T細(xì)胞的功能。有研究表明，在小鼠上用抗體阻斷PD1后，CAR-T細(xì)胞功能得到增強(qiáng)。PD-1抗體可以提高CAR-T細(xì)胞功能，但是注射抗體后全身阻斷PD1，增強(qiáng)了自體所有反應(yīng)T細(xì)胞的激活，導(dǎo)致毒性較大。將CAR-T中PD-1的表達(dá)沉默只特異性解除腫瘤細(xì)胞對(duì)CART細(xì)胞的抑制作用，而不會(huì)對(duì)其他T細(xì)胞發(fā)揮作用，從而降低毒性，更好的發(fā)揮CART細(xì)胞抗腫瘤的效果。

間皮素是一種腫瘤相關(guān)抗原，最早是Ira Pastan和Mark Willingham在卵巢癌中發(fā)現(xiàn)。他們發(fā)現(xiàn)間皮素高表達(dá)于卵巢癌細(xì)胞，但除了間皮細(xì)胞，在其他正常組織中不表達(dá)。目前研究發(fā)現(xiàn)，間皮素在間皮瘤、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌及其他腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常組織中有限表達(dá)。鑒于此，間皮素被列為一個(gè)免疫治療的潛在靶點(diǎn)。目前，靶向間皮素的抗體及靶向間皮素的嵌合抗原受體T細(xì)胞(CART)等免疫治療手段已有報(bào)道，但是發(fā)現(xiàn)用小鼠的抗人間皮素抗體所構(gòu)建的CART在臨床中出現(xiàn)抗鼠抗體及過(guò)敏反應(yīng)等毒副作用以及相關(guān)腫瘤的治療中療效不理想等情況，因此需要進(jìn)一步完善現(xiàn)有治療技術(shù)，增強(qiáng)其療效并控制好風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，本領(lǐng)域仍然需要進(jìn)一步的研究，開(kāi)發(fā)一種能更有效、特異性好、副作用小地治療血液腫瘤和實(shí)體瘤的CAR-T細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有自殺基因開(kāi)關(guān)的靶向人間皮素的工程化免疫細(xì)胞。

具體地，本發(fā)明的目的在于提供一種靶向間皮素(MSLN)的嵌合抗原受體T細(xì)胞，通過(guò)基因沉默的方法將其表面分子PD-1表達(dá)沉默，增加其腫瘤殺傷作用，同時(shí)加有自殺基因開(kāi)關(guān)，以阻斷未知的或不可控的遠(yuǎn)期毒性，保證患者的安全。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種工程化的免疫細(xì)胞，所述工程化的免疫細(xì)胞為T(mén)細(xì)胞或NK細(xì)胞，并且所述的免疫細(xì)胞細(xì)胞具有以下特征：