[發明專利]一種小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法

在審

• 申請號: 201710903584.7
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN107581066A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 史月龍;曾宋君;吳英亮;劉文斌;吳坤林;湯靜
• 申請（專利權）人: 南京仙草堂生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙)32251
• 代理人: 王華

1.一種小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：包括下列步驟：

第一步：外植體消毒；

第二步：類原球莖誘導培養；

第三步：類原球莖增殖培養；

第四步：類原球莖分化培養；

第五步：生根壯苗培養；

第六步：出瓶移栽。

2.根據權利要求1所述的小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：在采集外植體30天前，先用500-800倍體積的多菌靈澆灌小花萬代蘭植株，并噴施小花萬代蘭植株的葉片，一周之后再用質量分數為72%的農用鏈霉素可溶性粉劑的3000-4000倍體積的水溶液澆灌小花萬代蘭植株，并噴施小花萬代蘭植株的葉片，然后用解剖刀對所述小花萬代蘭植株的頂芽進行切取，獲得長度為2~4厘米的頂芽為外植體。

3.根據權利要求2所述的小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：先用干燥的棉花擦拭所述外植體，再用乙醇浸泡的棉花擦拭，然后將外植體切成小段，每段包含至少一個芽點，再用乙醇浸泡，然后用無菌水清洗，接下來用HgCl₂浸泡，然后用無菌水清洗，吹干水分后剝去苞葉，再用HgCl₂浸泡，吹干水分后得到吹干的嫩芽。

4.根據權利要求3所述的小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：于無菌條件下，對所述吹干后的嫩芽進行切取，獲得高度為1~2厘米的帶節的莖段和頂芽，然后接種到類原球莖誘導培養基上，所述莖段節位和頂芽基部節位有腋芽產生，外植體基部切口膨大形成顆粒突起后，轉移到新的類原球莖誘導培養基進行培養，獲得類原球莖繁殖材料；培養條件為：溫度為23~27℃，光照度為1500～2000lx，光照時長為11~13h/天；所述類原球莖誘導培養基的pH 值為5.4-5.6；每升所述類原球莖誘導培養基含有1～2g的花寶1號、1～2g的花寶2號、20～40mg的硫酸亞鐵、20～40mg的乙二胺四乙酸二鈉、0.5～2g的蛋白胨、50～100mL的椰子汁、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的鹽酸硫胺素、0.4~0.8mg的鹽酸吡哆醇、0.4~0.8mg的煙酸、5.0~8.0mg的 6-芐基嘌呤、0.2~2mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的瓊脂。

5.根據權利要求4所述的小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：將所述類原球莖繁殖材料轉接至增殖培養基進行培養，獲得增殖的類原球莖繁殖材料；培養條件為：溫度為23~27℃，光照度為1500～2000lx，光照時長為11~13h/天；所述增殖培養基的pH 值為5.4-5.6；每升所述增殖培養基含有1～2g的花寶1號、1～2g的花寶2號、20～40mg的硫酸亞鐵、20～40mg的乙二胺四乙酸二鈉、0.5～2g的蛋白胨、40～80g的土豆泥、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的鹽酸硫胺素、0.4~0.8mg的鹽酸吡哆醇、0.4~0.8mg的煙酸、2.0~5.0mg的6-芐基嘌呤、0.2~0.5mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的瓊脂。

6.根據權利要求5所述的小花萬代蘭種苗組織培養繁殖方法，其特征在于：將所述增殖的類原球莖繁殖材料轉接至分化培養基進行培養，分化形成高度為3~5厘米的不定芽；培養條件為：溫度25~29℃，光照度2000～3000lｘ，光照時長為11~13小時/天；每升所述分化培養基含有1～2g的花寶1號、1～2g的花寶2號、20～40mg的硫酸亞鐵、20～40mg的乙二胺四乙酸二鈉、0.5～2g的蛋白胨、40～80g的土豆泥、50～100mg的活性碳、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的鹽酸硫胺素、0.4~0.8mg的鹽酸吡哆醇、0.4~0.8mg的煙酸、3.0~6.0mg的6-芐基嘌呤、0.2~0.5mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的瓊脂；所述分化培養基的pH值為 5.4-5.6。