[發(fā)明專利]一種改善高糖高脂環(huán)境下骨骼肌萎縮的CD29+

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710894615.7
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN107529547B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐靜
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省拓華生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種改善高糖高脂環(huán)境下骨骼肌萎縮的CD29⁺人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法，步驟如下：將抗人CD29抗體與多聚賴氨酸混勻，平鋪于培養(yǎng)皿；用PBS溶液將臍帶洗滌至無血跡變白；將組織剪成小段縱向剖開，去除血管和臍帶外皮后將華爾通膠剪成小片；將小片臍帶組織剪碎成泥狀后加入0.25%的膠原酶IV,消化，加入10%胎牛血清的ɑ?MEM培養(yǎng)液混勻，離心，將下部沉淀細(xì)胞加入適量10%胎牛血清的ɑ?MEM培養(yǎng)液種入上述培養(yǎng)皿中，于5%CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)；棄上清，添加適量10%胎牛血清的ɑ?MEM培養(yǎng)液，每隔3天換一次液，待融合率達(dá)85%以上，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。本發(fā)明為后續(xù)研究和研制治療高糖高脂環(huán)境下骨骼肌萎縮的藥物奠定了理論基礎(chǔ)和試驗依據(jù)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及間充質(zhì)干細(xì)胞領(lǐng)域，具體是一種改善高糖高脂環(huán)境下骨骼肌萎縮的CD29⁺人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

骨骼肌質(zhì)量和完整性對于肌肉骨骼系統(tǒng)的正常功能以及有效的營養(yǎng)攝取和儲存至關(guān)重要。骨骼肌組織是身體最大的代謝活性組織、主要的葡萄糖代謝部位和病理狀況下其他器官的燃料儲存器。肌肉萎縮不僅伴隨許多常見的疾病而產(chǎn)生，例如癌癥，腎/心力衰竭，敗血癥，肌肉遺傳疾病和神經(jīng)退行性疾病等，還發(fā)生在健康的個體上，如在腿部骨折的固定，臥床休息期間。成年肌肉質(zhì)量的主要決定因素是外源必需氨基酸（需要通過膳食蛋白質(zhì)攝入獲得）和運(yùn)動。缺乏能量攝入，不活動，太空飛行或肢體固定等因素都將導(dǎo)致肌肉橫截面積（CSA）的減少，相關(guān)的功能喪失和肌肉胰島素抵抗。更重要的是，肌肉量的喪失與更多疾病的發(fā)病率和死亡率相關(guān)，特別是在老年人群中，肌肉量的喪失在2型糖尿病患者中形成加速。

胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取也因肌肉萎縮而減弱。也就是說，肌肉萎縮將導(dǎo)致2型糖尿病胰島素抵抗（IR）。有研究人員對年輕男性進(jìn)行了為期1周的睡眠研究，證明肌肉質(zhì)量減少導(dǎo)致全身胰島素敏感性降低。然而，IR在驅(qū)動肌肉萎縮中的作用尚不清楚。另有研究報告證明，持續(xù)性IR患者加速肌肉質(zhì)量下降，肌肉質(zhì)量的下降與糖尿病或糖化血紅蛋白（HbA1c）的持續(xù)時間呈負(fù)相關(guān)。在3年研究期間，與2期糖尿病患者相比，老年2型糖尿病患者膝關(guān)節(jié)伸肌強(qiáng)度下降了近50％，這表明老年2型糖尿病患者肌肉力量下降加速。在進(jìn)一步研究中，有學(xué)者報道了患有和不伴有糖尿病的個體之間在行走速度，肌肉力量，力量和肌肉質(zhì)量等方面的差異是獨(dú)立于共存的外周運(yùn)動神經(jīng)病或外周血管疾病，這表明糖尿病本身對肌肉病變有直接影響。另有證據(jù)表明，在2型糖尿病中加速的肌肉損失不受胰島素治療的影響，這可能與IR有關(guān)。因此，2型糖尿病骨骼肌質(zhì)量改變的發(fā)生不好預(yù)測，并且程度不同。

幾項研究的證據(jù)表明，飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸可能起到差異調(diào)節(jié)骨骼肌質(zhì)量和功能的作用。例如，C2C12肌管被棕櫚酸處理后（循環(huán)飽和脂肪酸最豐富）肌管直徑減小并且胰島素信號被抑制。與此相應(yīng)，據(jù)報道肌肉細(xì)胞中的棕櫚酸酯促進(jìn)誘導(dǎo)前萎縮基因的表達(dá)，如atrogin-1 / MAFbx，并伴隨其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子FoxO3（叉頭蛋白）核定位的增加。相比之下，幾個體內(nèi)研究也報道了不飽和脂肪酸具有預(yù)防肌量減少和/或萎縮的作用。例如，研究表明攜帶結(jié)腸腺癌的癌癥惡病質(zhì)動物模型（飲食中補(bǔ)充共軛亞油酸）能夠保持腓腸肌的肌量；二十碳五烯酸（EPA）弱化惡病質(zhì)誘導(dǎo)MAC16腫瘤的小鼠腓腸肌減少蛋白質(zhì)降解；EPA還預(yù)防了在施用弗氏佐劑后大鼠腓腸肌肌量的減少，同時使阿霉素-1 / MAFbx和MuRF1基因表達(dá)正常化。另外，營養(yǎng)不良的倉鼠喂飼富含PUFAα-亞麻酸（ALA）的飲食后，肌肉形態(tài)和功能得到改善，其中包括肌纖維增大。同時，ω-3和ω-6 PUFA也被證明可以增加p70S6K1蛋白在Thr389處的磷酸化，表明其在L6肌細(xì)胞的肌原性分化過程中活性增加。

肌肉重塑發(fā)生在整個生命中，觸發(fā)肌肉重塑的因素非常復(fù)雜，所以不同的治療方案可不同程度的延緩疾病的進(jìn)程。目前，最先進(jìn)的治療方法是使用肌原性干細(xì)胞來延緩萎縮并用新的健康和功能性肌肉纖維替代患病肌肉。

發(fā)明內(nèi)容