[發明專利]一種液質聯用檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的方法

有效

• 申請號: 201710886096.X
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107817311B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 房芳;何鵬飛;陳啟;郝星凱;孫姍姍;章虎
• 申請（專利權）人: 綠城農科檢測技術有限公司;陳啟
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 郭小麗

本發明公開了一種液質聯用檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的方法，包括以下步驟：(1)在配方奶粉樣品中加入質量濃度為10～70％的乙腈水溶液，提取得到配方奶粉中的標記肽，通過液質聯用檢測標記肽的含量，得到配方奶粉中標記肽含量；(2)采用與步驟(1)相同的方法提取所述配方奶粉樣品中所使用的酪蛋白磷酸肽原料中的標記肽，通過液質聯用檢測標記肽的含量，得到酪蛋白磷酸肽原料中標記肽含量；(3)按照下列公式計算得到所述配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量，配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量＝配方奶粉中標記肽含量/酪蛋白磷酸肽原料中標記肽含量；其中，所述標記肽的序列為VLPVPQK。本發明可用于檢測市場上大多數CPP產品。

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種液質聯用檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的方法。

背景技術

酪蛋白是奶中的主要蛋白質，經腸胃道消化后，會水解形成多種具有生物活性的多肽。在這些水解多肽中，有部分多肽富含絲氨酸，絲氨酸易與磷酸基團結合，故將這部分多肽總稱為酪蛋白磷酸肽(CPP)。CPP能夠在特定的pH 環境下與鈣、鋅等金屬離子結合，增加其水溶性、促進吸收、提高這些金屬離子的生物利用率。

由于嬰幼兒的消化功能尚未發育完全，無法有效消化酪蛋白。所以嬰幼兒配方乳粉企業通過體外酶解酪蛋白獲得CPP，并且將其添加到嬰幼兒配方奶粉中，以期獲得促進鈣吸收的效果。但是由于缺乏CPP相關標準品與檢測方法，給生產企業對產品質量控制帶來了不便，也對監管單位的監管活動帶來的困難。

目前檢測方法是在將pH調節至4.6以除去未水解酪蛋白之后，將CPP用鋇離子與乙醇沉淀出來，再通過重量法計算其含量。該方法僅適用于高濃度原料中CPP含量的測定，并不適用于配方乳粉，主要原因是CPP在配方乳粉中的加入量通常很低，該方法無法提供足夠的靈敏度；其次，該方法的特異性不佳，配方乳粉中的乳清蛋白也會影響檢測結果。

另外有部分學者嘗試使用HPLC法檢測配方乳粉中的CPP，他們通過對比CPP原料和配方乳粉的色譜峰，選擇CPP所特有的色譜峰用來建立標準曲線以及檢測配方乳粉中CPP的添加量。但是該方法也存在著以下不足：

首先由于缺乏CPP單一多肽的標準品，難以判斷樣品色譜峰的來源；其次 HPLC法通常采用紫外檢測器，其靈敏度不佳，所以樣品需要經過繁瑣的濃縮過程；同時紫外檢測器特異性低，配方乳粉中許多物質也同樣會在280nm波長下檢測出來，導致特征峰無法和雜質峰基線分離。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種酪蛋白磷酸肽的標記肽，可以用于對配方奶粉中酪蛋白磷酸肽的檢測。

本發明的技術方案為：一種酪蛋白磷酸肽的標記肽，所述標記肽的氨基酸序列為VLPVPQK。

本發明還提供了一種液質聯用檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的試劑盒，包括標記肽，所述標記肽為上述的標記肽。

作為優選，還包括同位素標記肽，所述同位素標記肽的序列為VL*PV*PQK，其中L*為[¹³C₆，¹⁵N]-亮氨酸，V*為[¹³C₆，¹⁵N]-纈氨酸。

本發明還提供了上述的試劑盒在檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的應用。

本發明還提供了一種液質聯用檢測配方奶粉中酪蛋白磷酸肽含量的方法，包括以下步驟：

(1)在配方奶粉樣品中加入質量濃度為10～70％的乙腈水溶液，提取得到配方奶粉中的標記肽，通過液質聯用檢測標記肽的含量，得到配方奶粉中標記肽含量；

(2)采用與步驟(1)相同的方法提取所述配方奶粉樣品中所使用的酪蛋白磷酸肽原料中的標記肽，通過液質聯用檢測標記肽的含量，得到酪蛋白磷酸肽原料中標記肽含量；