[發(fā)明專利]一種從腫瘤細(xì)胞上清液中分離外泌體的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710885748.8 | 申請日： | 2017-09-18 |
| 公開（公告）號： | CN108148809A | 公開（公告）日： | 2018-06-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王學(xué)習(xí);馬占軍;路莉;胡燕;崔雪;陳果湖;楊洋 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘭州大學(xué) |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 730000 甘肅*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 超濾離心 腫瘤細(xì)胞 超濾液 膜過濾 上清液 富集 細(xì)胞培養(yǎng)上清液 聚乙二醇溶液 腫瘤細(xì)胞生長 分離過程 擴(kuò)增培養(yǎng) 培養(yǎng)基 醇溶液 混勻 匯合 沉淀 耗時 取材 | ||
1.一種從腫瘤細(xì)胞上清液中分離外泌體的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到50％-90％時，換用無外泌體血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h-48h后，收集細(xì)胞上清液，0℃-4℃條件下，依次500-1000×g和1500-2500×g各離心15min以去除細(xì)胞或細(xì)胞碎片，收集上清液；
S2：將所得的上清液用無菌過濾器過濾，收集濾液，在0℃-4℃條件下，將所得濾液2000-4000×g離心15min，收集上清液；
S3：將步驟S2得到的上清液轉(zhuǎn)移至超濾離心管，在0℃-4℃條件下，3000-5000×g離心30min，收集超濾液；
S4：向步驟S3得到的超濾液內(nèi)按與超濾液體積1∶1的比例加入5w/v％-20w/v％聚乙二醇溶液，上下顛倒離心管，混勻，4℃孵育過夜；
S5：將孵育后的液體在室溫或4℃，1500×g離心30min，離心管底部可見米白色沉淀；去除上清，1500×g繼續(xù)離心5min，去除上層的液體，得到的沉淀即為外泌體。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從腫瘤細(xì)胞上清液中分離外泌體的方法，其特征在于，所述無菌過濾器的規(guī)格為0.22μm或0.45μm。
3.如權(quán)利要求1所述的一種從腫瘤細(xì)胞上清液中分離外泌體的方法，其特征在于，所述步驟S3中的超濾離心管的規(guī)格為10KD、30KD或100KD。
4.如權(quán)利要求1所述的一種從腫瘤細(xì)胞上清液中分離外泌體的方法，其特征在于，所述步驟S4中孵育的時間不少于12h。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于蘭州大學(xué)，未經(jīng)蘭州大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710885748.8/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 同類專利
- 專利分類
- 海嘧啶誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究
- 原發(fā)性癌和轉(zhuǎn)移性癌的治療
- 寡核苷酸增強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞裂解物及其用于治療腫瘤的方法
- 腫瘤細(xì)胞核靶向藥物載體及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
- 一種腫瘤化療藥物制劑組合
- 體外檢測免疫細(xì)胞殺傷效率的方法
- 一種針對甲狀腺癌的抗腫瘤劑
- 一種促腫瘤細(xì)胞增殖周期進(jìn)展藥物聯(lián)合化療應(yīng)用于惡性腫瘤的治療方法
- 腫瘤特異性TIL和DNT細(xì)胞的遞進(jìn)式分離和培養(yǎng)方法
- 一種促進(jìn)DNT細(xì)胞擴(kuò)增與活化的方法
