[發明專利]一種放療耐受肺癌細胞系及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201710873780.4
• 申請日: 2017-09-25
• 公開（公告）號: CN107779438B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 張仕蓉;張靜靜;趙妍妍;馬勝林;吳瓊;許雅思;黃海琇
• 申請（專利權）人: 杭州市第一人民醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N13/00;C12Q1/02;A01K67/027
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈自軍

本發明公開了一種放療耐受肺癌細胞系及其構建方法和應用。所述放療耐受肺癌細胞系，命名為人肺腺癌輻射耐受性細胞株PC9?RR，保藏號為：CGMCC No.14314。本發明放療耐受肺癌細胞系由人肺腺癌細胞株PC9經多次X射線照射和培養后獲得的放療耐受的細胞，放療耐受性強且穩定，在作為肺癌放療抵抗機制研究的細胞模型等多個方面具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種放療耐受肺癌細胞系及其構建方法和應用。

背景技術

肺癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一，總體預后較差，5年生存率約為17％。目前，放射治療仍是肺癌綜合治療的重要組成部分，約60％-70％的肺癌患者在病情的不同階段需要接受放射治療。隨著影像和放療技術的不斷進步，對于無法手術的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期，以及局限的Ⅳ期患者，放療更是作為一種主要的根治性手段而廣泛用于臨床。對于多處轉移的Ⅳ期患者，近年來出現的靶向和免疫藥物治療也為晚期肺癌患者帶來了更多的生存時間和機會，這也為放療在這部分人群中的應用提供了更多的臨床空間。然而，臨床常規劑量放療后(50-70Gy)，約40-50％的病例會出現局部病灶未控或復發，放療耐受是導致局部治療失敗的主要因素。

腫瘤細胞的放療抵抗性產生是一個多基因、多因子和多機制共同作用的復雜過程，放療抵抗可能是由于腫瘤異質性，包括腫瘤細胞的起源、病理、病因學和分子/基因發病機理和在治療過程中發生的獲得性抵抗，或者因放射治療抵抗的腫瘤微環境產生引起。然而，到目前為止，對肺癌細胞產生放療抵抗的具體機制尚不明確，亟待進一步挖掘和研究。

通過X射線對細胞反復篩選獲得具有放療耐受性的細胞株，與親本細胞進行對照研究，是在體外研究放療抵抗機制的重要方法。因此，放療耐受性細胞株是研究放療抵抗機制、篩選放療分子標志物、優化臨床放療策略、實現個體化靶向放療等生物醫學問題的重要材料，建立和鑒定肺癌放療耐受細胞株，不僅有利于鑒定其分子指紋，深入解析放療殺傷腫瘤細胞的分子機制，并且有利于篩選出放療耐受的分子標志物及放療耐受預測模型的建立。

發明內容

本發明針對現有技術中缺少放療耐受的肺癌細胞株的問題，提供了一種放療耐受肺癌細胞系及其構建方法和應用。

一種放療耐受肺癌細胞系，命名為人肺腺癌輻射耐受性細胞株PC9-RR(簡稱PC9-RR)，保藏號為：CGMCC No.14314。本發明放療耐受肺癌細胞系由人肺腺癌細胞株PC9(簡稱PC9)經多次循環X射線輻射、培養后獲得的一株放療耐受的細胞，命名為：人肺腺癌輻射耐受性細胞株PC9-RR，于2017年8月17日保藏于位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCNo.14314。

本發明又提供了所述的放療耐受肺癌細胞系的子代細胞。所述子代細胞基本或全部保留了親代細胞的特性。

本發明又提供了所述的放療耐受肺癌細胞系作為肺癌放療抵抗機制研究的細胞模型中的應用。

本發明又提供了所述的放療耐受肺癌細胞系在建立放療抵抗的哺乳動物肺癌模型中的應用。所述的哺乳動物為裸小鼠或裸大鼠。通過將一定細胞數量的所述PC9-RR細胞接種于裸小鼠或裸大鼠的皮下、肝臟、腹腔或者尾靜脈等部位，獲得放療抵抗的肺癌的動物模型。

本發明又提供了所述的放療耐受肺癌細胞系在篩選、提取肺癌放療耐受分子標志物中的應用。通過與正常的肺細胞及其他種類的癌癥細胞進行比較研究，可以發現肺癌的分子標記，特別是放療耐受有關的分子標記，針對該分子標記可以進行后續的疾病檢測及藥物開發等方面的應用。

本發明又提供了所述的放療耐受肺癌細胞系在篩選或評估治療放療耐受的肺癌的藥物中的應用。首先，通過向所述PC9-RR細胞的培養基中添加不同藥物，觀察細胞狀態變化，獲得初步有效的候選藥物。然后，將候選藥物施藥于上述肺癌的動物模型，觀察與未施藥組動物的存活期、腫瘤大小、轉移情況等，篩選獲得潛在治療放療耐受性的肺癌的藥物。