[發(fā)明專利]一種檢測(cè)P16抑癌基因缺失的方法、探針及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710860045.X
• 申請(qǐng)日: 2017-09-21
• 公開（公告）號(hào): CN109536609A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 繆為民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇蒙特立生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886
• 代理公司: 天津?yàn)I海科緯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 張會(huì)雪

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)P16抑癌基因缺失的方法、探針及試劑盒，該方法采用一組雙色探針對(duì)癌癥組織進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述P16抑癌基因的缺失。所述的一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的P16基因探針(2)標(biāo)記為綠色的9號(hào)染色體中心粒探針。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)周全，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性高，可以快速，準(zhǔn)確，直觀地測(cè)出P16抑癌基因的缺失，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師對(duì)惡性腫瘤進(jìn)行分子病理分型的參考依據(jù)，適用于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及惡性腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種P16抑癌基因缺失的檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒。

背景技術(shù)

p16基因又叫MTS(multiple tumor suppressor 1)基因，是1994年美國(guó)冷泉港實(shí)驗(yàn)室Kamb等發(fā)現(xiàn)的新抗癌基因，這是一種細(xì)胞周期中的基本基因，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂，在人類50％腫瘤細(xì)胞株純發(fā)現(xiàn)有純合子缺失，突變，認(rèn)為p16是比p53更重要的一種新型抗癌基因.有人把它比作細(xì)胞周期中的剎車裝置，一旦失靈則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖，導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生。P16基因已經(jīng)在肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌和淋巴瘤、黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)純合子缺失以及無義，錯(cuò)義及移碼突變，表明p16基因以缺失，突變方式廣泛參予腫瘤形成，檢測(cè)p16基因有無改變對(duì)判斷患者腫瘤的易感性以及預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后，具有十分重要的臨床意義。

抑癌基因(tumor suppressor gene)是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，是維持機(jī)體正常生命活動(dòng)所必須的，在進(jìn)化上高度保守。當(dāng)抑癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生缺失，使細(xì)胞過度增殖，從而形成腫瘤。P16是一種和肺癌發(fā)病密切相關(guān)的位于人類9號(hào)染色體(2p16.1)的抑癌基因。P16基因的缺失，對(duì)于肺癌等惡性腫瘤的靶向治療具有重要指導(dǎo)意義。

目前，市場(chǎng)上檢測(cè)P16基因缺失主要用PCR方法，由于檢測(cè)的是腫瘤和正常細(xì)胞的混合物，因此結(jié)果不夠準(zhǔn)確，而市場(chǎng)上亦迫切需要一種更為準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的就是提供一種P16抑癌基因缺失的FISH檢測(cè)方法，探針及試劑盒。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

本發(fā)明提供了一種P16抑癌基因缺失的FISH檢測(cè)方法，該方法采用一組雙色探針對(duì)癌癥組織進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在所述P16抑癌基因的缺失。所述的一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的P16基因探針(2)標(biāo)記為綠色的9號(hào)染色體中心粒探針。

本發(fā)明還提供了一種P16FISH檢測(cè)探針，該探針為一組雙色探針，所述的一組雙色探

針是(1)標(biāo)記為紅色的P16基因探針(2)標(biāo)記為綠色的9號(hào)染色體中心粒探針。

本發(fā)明還提供了一種P16抑癌基因缺失的FISH檢測(cè)試劑盒，該試劑盒包括一組雙色探針，還包含細(xì)胞核染色試劑DAPI，熒光淬滅劑，以及FISH探針稀釋液；所述的一組雙色探針是(1)標(biāo)記為紅色的P16基因探針(2)標(biāo)記為綠色的9號(hào)染色體中心粒探針。

本發(fā)明所具有的有益效果：

本發(fā)明方法設(shè)計(jì)周全，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性高，可以快速，準(zhǔn)確，直觀地測(cè)出P16抑癌基因的缺失，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師對(duì)惡性腫瘤進(jìn)行分子病理分型的參考依據(jù)，適用于大規(guī)模推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說明。下列具體實(shí)施例采用的主要試劑，儀器和操作步驟如下：

一、探針DNA的獲取

1)劃線接種：將攜帶有P16基因和9號(hào)染色體中心粒的BAC菌種劃線接種于含有抗生素(氯霉素)的瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)過夜(約14小時(shí))。