[發明專利]肺癌細胞特異性結合多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201710852546.3
• 申請日: 2017-09-19
• 公開（公告）號: CN109517036B
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 魏輝;韓化敏
• 申請（專利權）人: 拜西歐斯（北京）生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 王思琪;劉小立

本申請提供了以高的親和力和特異性結合肺癌細胞的多肽，可用于指示肺癌細胞以及肺癌診斷。還提供了編碼多肽的核酸分子、制備多肽的方法以及包含該多肽的癌癥診斷偶聯物以及試劑盒。

技術領域

本發明屬于蛋白質多肽技術領域，具體涉及一種可與肺癌細胞特異性結合的多肽及其制備方法。

背景技術

肺癌發生于支氣管黏膜上皮，其發病率和死亡率增長很快。近50年來肺癌的發病率顯著增高，在歐美工業發達國家和我國的一些工業大城市中，肺癌發病率在男性惡性腫瘤中已居首位；女性發病率也迅速增高，位居女性常見惡性腫瘤的第2位。因此，肺癌是對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。由于肺癌發病的隱匿性，發病早期多無癥狀，導致幾乎2/3的肺癌患者在就診時已是晚期(Ⅲ期或Ⅳ期)。目前，我國肺癌早期診斷率較低，導致患者5年生存率僅有10％，而國外發達國家是15％-20％。因此，急需提高肺癌早期診斷率。

傳統的肺癌臨床診斷方法如胸片、支氣管鏡、痰細胞學檢查等方法缺乏足夠的特異性和敏感性，因此急需開發出一種新的用于臨床診斷肺癌、特別是早期肺癌的方法。

隨著腫瘤分子生物學研究的進展，越來越多的肺癌標記物及篩查手段被應用于臨床。腫瘤標志物是指在腫瘤發生和增殖過程中，由腫瘤細胞所產生或分泌并釋放到血液、細胞、體液中而反映腫瘤存在和生長的一類物質。標志物檢測肺癌具有高效率、高靈敏性、方便、標本易獲取及創傷小等優點，因此篩選、鑒定及檢測腫瘤標志物一直是肺癌早期診斷研究的重點。

當前被認為有意義的肺癌腫瘤標志物有如下幾類：

癌胚抗原(CEA)；

糖蛋白類抗原：糖抗原(carbohydrate antigen)19-9、糖抗原15-3、鱗狀細胞癌抗原等；

角蛋白類抗原：細胞角蛋白片段抗原(cytokeratin fragment antigen)21-1、組織多肽特異性抗原(tissue polypeptide specific antigen)等。

酶類抗原：前胃液素肽(Pro-gastrinpeptide)、乳酸脫氫酶(lacticdehydrogenase)、谷胱甘肽轉移酶(glutathione transferase)、基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases)等。

雖然這些標志物有一定的代表性，但其缺點是特異性不高，如就CEA而言，除在胚胎性腫瘤組織外，在成人胃腸、肺、乳腺等腺癌組織中均表達癌胚抗原CEA。所以，本領域需要尋找肺癌細胞特異性的靶點。

癌癥診斷領域迫切需要開發靈敏度高，特異性強的體外診斷產品。采用特異性小分子肽識別實體腫瘤癌細胞作為一種新型的腫瘤鑒定手段，具有良好的商業發展前景。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足之處，篩選一種既具備傳統抗體分子的優點，而且分子量小，容易到達腫瘤組織部位，并以高的親和力和特異性與肺癌細胞結合的多肽。

本申請將編碼多肽的外源DNA片段與噬菌體表面蛋白的編碼基因融合，使融合蛋白展示在噬菌體的表面。導入的多種多樣的外源基因形成了一個庫。以蛋白或細胞為靶點，對噬菌體庫進行反復篩選，并隨之對其進行擴增，特定的噬菌體克隆由于對其配體的特異親和性而不斷地得到富集，從而能夠快速、有效地將相對稀少的可以高效結合配體的克隆從文庫中篩選出來。

本申請的第一方面提供了一種指示肺癌細胞的多肽，所述多肽具有SEQ.ID.No.1所示的氨基酸序列或與SEQ.ID.No.1具有80％-99％同源性的氨基酸序列。優選地，所述肺癌細胞是A549細胞。