[發明專利]小鼠Shank 3基因cRNA探針及原位雜交顯色方法

有效

• 申請號: 201710842902.3
• 申請日: 2017-09-18
• 公開（公告）號: CN107574228B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 陳晶;郭保霖;蔡國洪;吳菲菲;武勝昔
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841;C12Q1/6804;C12Q1/6883
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.一種小鼠Shank 3基因cRNA探針，其特征在于：該cRNA探針的序列如SEQ.ID.NO.3所示。

2.根據權利要求1所述一種小鼠Shank 3基因cRNA探針，其特征在于：所述cRNA探針是以小鼠腦組織cDNA為模板，并使用以下引物擴增得到的：

上游引物：5’-ACCCGAGACTCTGAGAGAGG-3’；

下游引物：5’-AATGGTGCTTGTGGTCTCCA-3’。

3.根據權利要求1所述一種小鼠Shank 3基因cRNA探針，其特征在于：所述cRNA探針上標記有地高辛。

4.一種小鼠Shank 3基因原位雜交顯色方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)制備用于原位雜交的小鼠腦組織標本；

2)將小鼠腦組織標本依次經過雜交前處理、雜交預處理后置于雜交液中進行原位雜交；所述原位雜交中采用的雜交液由雜交預處理中使用的預雜交液和小鼠Shank 3基因cRNA探針組成，所述cRNA探針的序列如SEQ.ID.NO.3所示；該cRNA探針上標記有地高辛；

3)雜交完成后依次進行漂洗、封閉，然后利用針對地高辛的抗體對結合在小鼠腦組織標本上的cRNA探針進行識別；然后利用TSA-biotin對結合在小鼠腦組織標本上的cRNA探針進行放大處理，然后進行熒光顯色；TSA-biotin由0.05g BSA、5μL tyramide-biotin、15μL的1.0mg/mL葡萄糖氧化酶、50μL的200mg/mLβ-D-葡萄糖以及5mL0.1 M PB組成；放大處理的條件為：經TNT以及0.1M PB漂洗后，于TSA-biotin中避光孵育20-40分鐘。

5.根據權利要求4所述一種小鼠Shank 3基因原位雜交顯色方法，其特征在于：所述雜交前處理中，將小鼠腦組織標本依次置于以下液體中進行處理：含體積分數1-3％H₂O₂的0.1M DEPC-PB中避光孵育10-20分鐘；0.1M DEPC-PB中漂洗10-20分鐘；含體積分數0.3％Triton X-100的0.1M DEPC-PB中孵育20-30分鐘；含體積分數0.25％乙酸酐的0.1M三乙醇胺中孵育10-20分鐘；0.1M DEPC-PB中漂洗1-3次，每次10-20分鐘。

6.根據權利要求4所述一種小鼠Shank 3基因原位雜交顯色方法，其特征在于：所述雜交預處理的條件為：于預雜交液中55-60℃孵育1-2小時；所述預雜交液由0.5mL的去離子甲酰胺、0.25mL的20×SSC、0.2mL的10％的封閉劑、0.01mL的10％SDS，以及0.05mL的2％的NLS組成。

7.根據權利要求4所述一種小鼠Shank 3基因原位雜交顯色方法，其特征在于：所述原位雜交的條件為：于雜交液中55-60℃孵育16-20小時，所述雜交液中cRNA探針的濃度為1-2μg/mL。