[發明專利]一種轉基因大豆WH8055轉化事件外源插入載體的右側翼序列

有效

• 申請號: 201710842277.2
• 申請日: 2017-09-18
• 公開（公告）號: CN107557359B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 馬瑞;蔡勤安;于志晶;尚麗霞;莊丹;王丹;任鵬飛
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 錢學宇

1.一種轉基因大豆WH8055轉化事件外源插入載體的右側翼序列，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.權利要求1所述右側翼序列在檢測轉基因大豆中的應用，其特征在于，所述轉基因大豆的第3號染色體第43998179位核苷酸處插入pCHAL1的T-DNA片段；所述轉基因大豆為WH8055或由其轉育的轉基因大豆。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，根據權利要求1所述右側翼序列設計用于檢測所述轉基因大豆的PCR引物對或雜交探針。

4.根據權利要求1所述右側翼序列設計的PCR引物對，其特征在于，所述引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示。

5.一種PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求4所述引物對，以及其他試劑。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述其他試劑包括DNA聚合酶、dNTPs、PCR反應緩沖液、陽性對照品和陰性對照品中的一種或多種。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶選自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段中的一種或多種。

8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為Taq DNA聚合酶。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶為熱啟動Taq DNA聚合酶。

10.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述其他試劑包括PCR反應的預混液，所述預混液為DNA聚合酶、dNTPs和PCR反應緩沖液的混合物。

11.權利要求4所述引物對或權利要求5～10任一項所述試劑盒的使用方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)以待測大豆樣品的DNA為模板，使用權利要求4所述引物對或權利要求5～10任一項所述試劑盒中的引物對和其他試劑進行PCR擴增；

(2)根據PCR擴增產物判定所述待測大豆的第3號染色體上第43998179位核苷酸處是否插入pCHAL1的T-DNA片段。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述PCR反應的退火溫度為49～51℃，循環數為28～32次。

13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于，所述PCR反應的退火溫度為50℃，所述循環數為30次。