[發(fā)明專(zhuān)利]捕獲癌細(xì)胞的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710826297.0
• 申請(qǐng)日: 2017-09-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107881150A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 皆川康久;田中賢;干場(chǎng)隆志;涉谷智和
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 住友橡膠工業(yè)株式會(huì)社;國(guó)立大學(xué)法人山形大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/09
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/09
• 代理公司: 上海華誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31300
• 代理人: 湯國(guó)華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于捕獲存在于生物流體(例如血液)中的癌細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

當(dāng)癌細(xì)胞形成時(shí)，已知其在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候會(huì)出現(xiàn)在血液或生物流體中。血液中的這種癌細(xì)胞稱(chēng)為“循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)”。因此，可以預(yù)期檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞來(lái)例如確認(rèn)癌癥治療效果，預(yù)測(cè)預(yù)后壽命，預(yù)測(cè)給藥前抗癌藥物的效果，或通過(guò)癌細(xì)胞的遺傳分析測(cè)試治療方法。

然而，存在的問(wèn)題在于，由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量非常少(數(shù)個(gè)到數(shù)百個(gè)細(xì)胞/1mL血液)，所以這樣的癌細(xì)胞難以捕獲。

例如，CellSearch System被稱(chēng)為用于捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞的技術(shù)。這種利用抗原抗體反應(yīng)(EpCAM抗體捕獲)的技術(shù)只能捕獲表達(dá)EpCAM的癌細(xì)胞，并且可捕獲的癌細(xì)胞的類(lèi)型受到限制。

引用列表

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：JP 2005-523981T

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明的目的在于解決上述問(wèn)題，提供一種捕獲癌細(xì)胞的方法，其可以捕獲多種類(lèi)型的癌細(xì)胞，所述癌細(xì)胞包括不表達(dá)EpCAM的癌細(xì)胞。

解決問(wèn)題的技術(shù)方案

本發(fā)明涉及一種用于捕獲存在于生物流體中的癌細(xì)胞的方法，該方法包括降低采樣的生物流體的蛋白質(zhì)水平，然后使用親水性聚合物層捕獲癌細(xì)胞。

親水性聚合物層優(yōu)選由選自聚(甲基)丙烯酰基嗎啉和由式(I)表示的聚合物的至少一種親水性聚合物形成：

式中R¹表示氫原子或甲基，R²表示烷基，m表示1～5，n表示重復(fù)數(shù)。

親水性聚合物層優(yōu)選由選自(甲基)丙烯酰基嗎啉和式(I-1)表示的化合物的至少一種親水性單體與第二單體的共聚物形成：

式中R¹，R²和m如上定義。

蛋白質(zhì)水平優(yōu)選通過(guò)稀釋采樣的生物流體來(lái)降低。稀釋優(yōu)選用緩沖溶液或液體培養(yǎng)基(liquid medium)進(jìn)行。

蛋白質(zhì)水平優(yōu)選通過(guò)離心采樣的生物流體并去除上清液來(lái)降低。

生物流體優(yōu)選為血液。

親水性聚合物層的厚度優(yōu)選為2～200nm。

發(fā)明的有益效果

根據(jù)本發(fā)明的用于捕獲存在于生物流體中的癌細(xì)胞的方法，包括降低采樣的生物流體的蛋白質(zhì)水平，然后使用親水性聚合物層捕獲癌細(xì)胞。這種方法可以捕獲許多類(lèi)型的癌細(xì)胞，包括不表達(dá)EpCAM的癌細(xì)胞。因此，例如，可以從生物流體中充分捕獲癌細(xì)胞，同時(shí)減少其它蛋白質(zhì)和細(xì)胞的粘附或附著，從而選擇性捕獲癌細(xì)胞。

附圖說(shuō)明

圖1是具有在其上形成有親水性聚合物層的孔的多孔板(醫(yī)療分析裝置)的示范性示意圖。

附圖標(biāo)記說(shuō)明

1：醫(yī)療分析裝置(多孔板)

11：孔

21：親水性聚合物層

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及用于捕獲存在于生物流體中的癌細(xì)胞的方法。該方法包括降低采樣的生物流體的蛋白質(zhì)水平，然后使用親水性聚合物層捕獲癌細(xì)胞。

在該方法中，首先對(duì)采樣的生物流體進(jìn)行稀釋或離心等處理，以制備具有比采樣的生物流體低的蛋白質(zhì)水平的樣品，并使樣品與親水性聚合物層接觸以捕獲樣品中的癌細(xì)胞。因此，由于白蛋白等蛋白質(zhì)對(duì)抑制細(xì)胞粘附具有降低的效果，并且能夠提供癌細(xì)胞對(duì)親水性聚合物的固有粘附，因此能夠大大提高捕獲癌細(xì)胞的能力，同時(shí)降低捕獲血小板等的能力。結(jié)果是，實(shí)現(xiàn)當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)以高水平存在時(shí)不可能產(chǎn)生的選擇性地捕獲癌細(xì)胞的效果。

具體地說(shuō)，由于生物流體中出現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)數(shù)量如循環(huán)腫瘤細(xì)胞(數(shù)個(gè)至數(shù)百個(gè)細(xì)胞/1毫升血液)的數(shù)量非常少，所以重要的是在采樣的生物流體中捕獲盡可能多的腫瘤細(xì)胞以分析它們。因此有必要減少抑制腫瘤細(xì)胞粘附的蛋白質(zhì)的數(shù)量。在本發(fā)明的方法中，預(yù)先制備具有比采樣的生物流體低的蛋白質(zhì)水平的樣品，然后與親水性聚合物層接觸。因此，生物流體中更多的腫瘤細(xì)胞吸附或粘附到親水性聚合物層上。然后，可以預(yù)期，例如為了確認(rèn)癌癥治療效果，計(jì)數(shù)吸附的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量以確定生物流體中的腫瘤細(xì)胞的數(shù)量。此外，可以培養(yǎng)所捕獲的腫瘤細(xì)胞，然后用于確定藥物如抗癌藥物的效果。這使得我們能夠在給藥之前體外確定藥物如抗癌藥物的效果，還有助于篩選藥物如抗癌藥物。

以下參考附圖描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中的實(shí)施例。

本發(fā)明的用于捕獲癌細(xì)胞的方法可以使用例如圖1所示的醫(yī)療分析裝置1(多孔板1)進(jìn)行。