[發明專利]一種過表達PCNP基因的藥物的制備及用途

有效

• 申請號: 201710824523.1
• 申請日: 2017-09-14
• 公開（公告）號: CN107630027B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 吳東棟;李濤;高熒苒;王大勇;陸丹;劉詩語;洪亞;魏建設;姬新穎
• 申請（專利權）人: 吳東棟;李濤;高熒苒;王大勇;陸丹;劉詩語;洪亞;魏建設;姬新穎
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C12N15/85;C12N15/52;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種過表達PCNP基因的藥物的制備及用途。該藥物包括過表達PCNP基因的質粒以及過表達PCNP基因獲得的PCNP蛋白。所述過表達PCNP基因的質粒的構建方法，其包括以下步驟：根據PCNP基因序列，設計引物，PCR擴增目的基因；對GV230載體中的限制性酶切位點Xho I和Kpn I進行酶切，形成線性化GV230載體；將目的基因與線性化GV230載體進行連接構建GV230?PCNP載體，即為過表達PCNP基因的質粒。將過表達PCNP基因的藥物用于人神經母細胞瘤中時，過表達人神經母細胞瘤中PCNP基因后，可促進細胞凋亡，抑制細胞生長；抑制細胞遷移；抑制人神經母細胞瘤的生長。

技術領域

本申請屬于生物制藥技術領域，具體涉及一種過表達PCNP基因的藥物的制備及用途。

背景技術

神經母細胞瘤(neuroblastoma，NB)屬胚胎性腫瘤，多位于大腦半球，是兒童最常見的顱外腫瘤，是嬰幼兒最常見的腫瘤。有將近一半的神經母細胞瘤發生在2歲以內的嬰幼兒。神經母細胞瘤約占6-10％的兒童腫瘤，15％的兒童腫瘤死亡率。

PCNP(PEST-containing nuclear protein)是一種新近發現的含有PEST序列的核蛋白，PCNP作為泛素連接酶NIRF(Np95/ICBP90-like RING figer protein)的底物首次于2004年由日本科學家側面報道，PCNP和NIRF一起構成一種新的信號轉導通路，與細胞周期的調控和細胞增殖有密切關系。PCNP主要存在細胞核內，這種新型的指環狀蛋白是一種具有泛素化能力的蛋白連接酶，參與到蛋白降解的泛素化途徑中。目前關于PCNP的相關報道較少，但關于PEST結構域的研究相對較多，PEST domin對于細胞周期和增殖具有調控作用，并且和染色體的穩定、腫瘤的發生以及免疫系統疾病有關。

另有實驗表明，PCNP在多種腫瘤組織中的表達顯著高于癌旁組織和正常對照組織。因而關于PCNP與腫瘤的相關性尚待進一步研究，而關于調節PCNP過表達在腫瘤治療中的作用更是缺乏相關的研究報道。

發明內容

基于上述現有技術中的缺陷，本發明的目的在于提供一種過表達PCNP基因的藥物的制備及用途，該藥物用于人神經母細胞瘤中，能夠促進細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的生長。

本發明的目的通過以下技術方案得以實現：

一方面，本發明提供一種過表達PCNP基因的質粒的構建方法，其包括以下步驟；

根據PCNP基因序列(NM_020357)，設計引物，PCR擴增目的基因；

對GV230載體中的限制性酶切位點Xho I和Kpn I進行酶切，形成線性化GV230載體；

將目的基因與線性化GV230載體進行連接構建GV230-PCNP載體，即為過表達PCNP基因的質粒。

上述過表達PCNP基因的質粒的構建方法中，優選地，PCR擴增目的基因的引物序列為：

正向引物：

5’-TACCGGACTCAGATCTCGAGCGCCACCATGGCGGACGGGAAGGCGGGAGAC-3’(如SEQ IDNO：1所示)；

反向引物：

5’-GATCCCGGGCCCGCGGTACCGTATTGTCTTGGTCATGGACATTTC-3’(如SEQ ID NO：2所示)。

上述過表達PCNP基因的質粒的構建方法中，優選地，所述GV230載體的載體順序為CMV-MCS-EGFP-SV40-Neomycin。

上述過表達PCNP基因的質粒的構建方法中，優選地，對構建的GV230-PCNP載體還包括對PCNP基因進行正確性鑒定，其步驟如下：