[發明專利]復方中藥具有化學成分含量差異的樣品構建方法

在審

• 申請號: 201710814163.7
• 申請日: 2017-09-11
• 公開（公告）號: CN107764911A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 姚宏亮;劉宏;蘇薇薇;李沛波;吳忠;王永剛;彭維
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州番禺容大專利代理事務所(普通合伙)44326
• 代理人: 劉新年,黃開艷

技術領域

本發明涉及復方中藥差異樣品的構建方法。

背景技術

復方中藥整體療效的發揮是有效成分群與多靶點間相互作用的結果。當有效成分群發生變化時，其藥效也會隨之發生改變。在此基礎上，根據成分與藥效間相關性，能夠辨析中藥中的有效成分群。通過復方中藥各味藥材的含量變化與其生物活性變化的關聯性，可以理清其各味藥材對藥效的貢獻、作用及之間的相互作用，能夠科學解析復方中藥的組方內涵。

為了更好的研究復方中藥中藥材、成分的變化與藥效間的相關性，明確其組方科學內涵及核心活性成分群，具有藥材、化學成分含量差異的復方中藥樣品的構建，是解決問題的關鍵所在。傳統的中藥化學研究中，采用化學成分逐一分離、再組合的方式來制備樣品，然而該方法一方面實現難度大、工作強度高，另一方面不符合中藥的混合性、整體性、統一性特點。

發明內容

本發明的目的在于：建立復方中藥具有化學成分含量差異的樣品構建方法，為解決復方中藥組方內涵的解析及活性成分群的辨識問題提供創新方法支撐。

本發明采用的技術方案如下：將復方中藥各味藥材組份單獨視作試驗因素，根據原處方比例確定各味藥材的投料量變化范圍，并在該范圍內確定合適的水平數；采用均勻設計方法，根據因素數、水平數選擇合適的均勻設計表進行藥材及其投料量的均勻排布；按照標準工藝流程制備多組差異樣品，并制作其指紋圖譜監測，采用聚類分析方法驗證差異樣品間的差異性，即完成所述差異樣品的構建。本方法優選組份3到6種中藥材的復方中藥。

所述試驗因素數為復方中藥的組份數。試驗水平數優選9-11水平。

各組份的投料量變化范圍設計方法為：非君藥組份的變化范圍為0％至其處方含量的2倍，君藥藥材的變化范圍為100％減去非君藥組份含量之和。

本發明的突出優點：與現有技術相比，本發明的有益效果在于首次公開了復方中藥具有化學成分含量差異的樣品構建方法，本方法尤其適合3至6味藥材組成的復方中藥。該方法不同于以往的化學成分逐一分離、再組合的方式，而是從整體對復方中藥的藥材進行重新調整、組合，具有實現難度小、適用性高的優點，符合中藥的混合性、整體性、統一性的特點。為復方血栓通制劑的臨床應用，進一步開發提供創新性的支撐。

附圖說明

圖1：本發明實施例1提供的復方血栓通膠囊差異樣品HPLC色譜圖。

圖2：本發明實施例1提供的復方血栓通膠囊差異樣品聚類分析結果圖。

圖3：本發明實施例2提供的腦栓通膠囊差異樣品HPLC色譜圖。

圖4：本發明實施例2提供的腦栓通膠囊差異樣品聚類分析結果。

圖5：本發明實施例3提供的口炎清顆粒差異樣品LC-MS/MS總離子流圖。

圖6：本發明實施例3提供的口炎清顆粒差異樣品聚類分析結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明構建方法做進一步的詳細說明。

實施例1：由三七、丹參、黃芪、玄參四味藥材組成的復方血栓通膠囊具有化學成分含量差異的樣品構建

1.材料

(1)儀器、試劑：數控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司，KQ-250DE)，渦旋振蕩器(Scientific Industries Vortex-Genie 2)，旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠，RE-5205/RE-2000B)，烘箱(Millipore，UFB400)，超純水器(Millipore Simplicity)，電子分析天平(Sartorius)，冰箱(Siemens)，燒杯、錐形瓶、蒸餾瓶等玻璃儀器；甲醇、乙腈、磷酸(色譜純)，超純水。

(2)藥材：三七，批號：161110；丹參，批號：161110；黃芪，批號：161110；玄參，批號：161110，由廣東眾生藥業股份有限公司提供。

2.方法

(1)三七、丹參、黃芪、玄參投料設計

復方血栓通膠囊的原處方比例中三七、丹參、黃芪、玄參所占比例分別為54％、10％、18％、18％。在均勻設計時，丹參在0％-20％間均勻變化，黃芪在0％-36％間均勻變化，玄參在0％-36％間均勻變化，君藥三七在33.2％-74.8％間均勻變化。根據四因素十一水平均勻設計表進行投料，見表1。

表1復方血栓通膠囊差異樣品的藥材投料量及其比例

(2)差異樣品的制備