[發明專利]γ突觸核蛋白的膠體金檢測裝置及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201710811087.4
• 申請日: 2017-09-11
• 公開（公告）號: CN109490542A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 荊志強;周光朋;韓曉亮;王建銘
• 申請（專利權）人: 博爾誠（北京）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 李渤;郭廣迅

1.一種γ突觸核蛋白的膠體金檢測裝置，所述裝置包括條狀基材，在所述條狀基材上依次設置樣本墊、膠體金結合物墊、反應膜和濾紙；其中，所述膠體金結合物墊上包被膠體金標記的鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2，所述反應膜上的檢測區(T)噴點鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG1、質控區(C)噴點羊抗鼠免疫球蛋白IgG；并且所述膠體金檢測裝置包含酪蛋白鈉作為穩定劑。

2.根據權利要求1所述的裝置的制備方法，所述方法包括以下步驟：

1)膠體金顆粒的制備：利用氯金酸與檸檬酸三鈉在沸水中發生氧化還原反應制備膠體金顆粒；

2)膠體金結合物的制備：采用物理吸附法，在pH7.5～8.5下，使膠體金顆粒與待標記的鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2結合，并加入酪蛋白鈉溶液作為穩定劑，從而形成膠體金標記的鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2結合物，并離心純化；

優選地，所述膠體金顆粒與鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2的質量比為13～26：1，優選比例為20:1；

優選地，所述酪蛋白鈉溶液中酪蛋白鈉的質量分數為5％～15％，優選地為10％；

3)膠體金結合物墊的制備：將步驟2)得到的膠體金結合物用膠體金結合物重懸液復溶至原體積，并按0.015～0.018ml/cm²的噴金量噴點在金標墊上，干燥；

優選地，所述噴金量為0.0166ml/cm²；

優選地，所述金標墊的規格為1cm*30cm/條；

4)反應膜制備：分別將0.6～1.2mg/ml鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG1、0.8～1.2mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗體包被到硝酸纖維素膜的檢測區(T)和質控區(C)，干燥即得；

優選地，所述鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG1的濃度為1.0mg/ml；

優選地，所述羊抗鼠IgG多克隆抗體的濃度為1.0mg/ml；

5)將濾紙、步驟3)制備的金結合物墊、步驟4)制備的反應膜、吸水紙依次粘貼在基材上。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，在步驟1)中，所述氯金酸濃度為10％(g/ml)，檸檬酸三鈉濃度為10％(g/ml)，煮沸時間為5分鐘；

優選地，在步驟1)中，氯金酸與檸檬酸三鈉的體積之比為1：2。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其中，在步驟2)包括以下步驟：

a.取100.0mL 0.02g～0.04g的膠體金于三角瓶中；

優選地，所述膠體金的重量為0.03g；

b.加入3.5mL 0.1M的碳酸鉀溶液，混勻，靜置10分鐘；

c.取鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2，其中，所述膠體金與鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2的質量比為(13～26)：1，優選為20:1；在攪拌條件下，將鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG2逐滴加入到三角瓶中，室溫放置20～60分鐘，優選為40分鐘；取5.0mL質量分數為10％的酪蛋白鈉溶液，在快速攪拌條件下，逐滴加入到三角瓶中，室溫靜置15分鐘；12000rpm、4℃下離心40分鐘，加入膠體金結合物重懸液至原體積；

優選地，在離心40分鐘后，快速倒去上清液，將離心管底向上、離心管口斜向下30-60度角，用粗纖維濾紙將離心管壁的液體吸掉。

5.根據權利要求2-4中任一項所述的方法，其中，在步驟4)中，檢測區包被液的制備包括以下步驟：

取鼠抗γ突觸核蛋白單克隆抗體αSNCG1 6.0-12.0mg，加入到3.0-6.0mL 0.05M PBS中，充分混勻后用0.05M PBS緩沖液定容至終體積10.0mL，使αSNCG1的終濃度為0.6-1.2mg/mL；

優選地，在步驟4)中，質控區包被液的制備包括以下步驟：

取羊抗鼠IgG多克隆抗體8.0-12.0mg，加入到4.0-6.0mL 0.05M PBS緩沖液中，充分混勻后用0.05MPBS緩沖液定容至終體積10.0mL，使羊抗鼠IgG多克隆抗體的終濃度為0.8-1.2mg/mL。