[發明專利]一種板栗菌根菌人工培養方法

在審

• 申請號: 201710808662.5
• 申請日: 2017-09-09
• 公開（公告）號: CN109486682A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 張坤
• 申請（專利權）人: 張坤
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)組織分離

取板栗菌根菌子實體，縱切為兩半，采集菌蓋與菌柄交匯處的菌肉組織塊；

2)菌絲培養與提純

將采集的菌肉組織塊置于斜面培養基中，在25～28℃下培養至菌肉組織塊萌發出菌絲后，將菌絲轉接至斜面培養基中，在25～28℃下培養至菌絲長滿斜面，獲得純菌絲；所述的斜面培養基的制作為：首先，用沸水煮馬鈴薯后過濾，回收濾液得到馬鈴薯汁液；其次，將板栗枯枝落葉水煮液、根際土壤水提液和水加入馬鈴薯汁液中后，加入瓊脂，邊加熱邊攪拌至瓊脂完全融化后，再加入葡萄糖，充分混勻后冷卻；最后，調節pH值為5～6；其中，馬鈴薯、葡萄糖和瓊脂的質量比為(10～20)：(1～2)：(1～1.5)，板栗枯枝落葉水煮液、根際土壤水提液和水的體積比為(2～5)：(1～2)：(2～5)；

3)菌種擴大培養

將純菌絲接種到擴大培養料中，在25～28℃下培養至菌絲長滿培養容器，獲得板栗菌根菌；所述的擴大培養料由基質和營養液按質量比10:2～3配成，且擴大培養料的含水質量為60～65％；其中，所述基質由板栗修剪枝條或栗苞的粉碎物與玉米粉按體積比(80～85):(20～15)混勻配成；所述營養液由水、白糖、KH2PO4、NH4Cl、CaSO4·2H2O、FeCl3按質量比80:10:3:5:1:1配制而成，調節pH值為5～6。

2.根據權利要求1所述的一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，所述的用沸水煮馬鈴薯的時間為30～50min；采用1mol/L NaOH或1mol/LHCL調節pH值為5～6。

3.根據權利要求1所述的一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，所述板栗枯枝落葉水煮液為：用沸水煮板栗枯枝落葉30～50min，靜置后過濾得到的濾液。

4.根據權利要求1所述的一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，所述根際土壤水提液為：用沸水煮板栗根際土壤30～50min，靜置后過濾得到的濾液。

5.根據權利要求1所述的一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，所述的板栗菌根菌子實體在組織分離前還包括預處理操作，是將采集的新鮮、壯實、中等成熟的野生板栗菌根菌子實體，先經無菌保鮮劑洗滌，再經75％的酒精浸泡消毒，最后經無菌水清洗。

6.根據權利要求5所述的一種板栗菌根菌人工培養方法，其特征在于，所述的無菌保鮮劑為：質量濃度為0.02～0.06％的抗壞血酸液和質量濃度為0.01～0.03％的檸檬酸液按體積比(1～5):(1～3)配成的混合液。