[發明專利]一種煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b及其克隆方法與應用

有效

• 申請號: 201710803449.5
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107365777B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 逄濤;白戈;楊大海;謝賀;李勇;姚恒;李永平;肖炳光;張誼寒;陳學軍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 謝喬良;方正巧

本發明公開了一種煙草尼古丁含量調控基因NtCLC?b，所述基因編碼一種調控煙草尼古丁含量的多肽，所述多肽包含的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示；所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC?b包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示本發明還公開了所述調控基因NtCLC?b的克隆方法及其應用。在煙草植株內過量表達NtCLC?b基因，可以明顯降低煙葉中尼古丁的含量，在實際生產中擁有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于遺傳工程技術領域，進一步屬于涉及煙草尼古丁的合成及調控相關基因，具體涉及一種煙草尼古丁含量的調控基因NtCLC-b及其克隆方法與應用。

背景技術

研究煙草尼古丁的代謝調控是非常有意義的一項工作，通過基因調控可以提供不同尼古丁含量的煙草品種，為煙草商業生產個性化尼古丁煙草產品提供原材料。尼古丁對人體有很強的生理刺激作用，是煙草商業性使用的物質基礎。許多世界頂級煙草公司如菲利普莫里斯，帝國煙草、日本煙草、英美煙草等公司都投入巨資對煙草尼古丁的代謝途徑、調控機制進行研究。

尼古丁是一種吡啶類生物堿，主要存在于茄科煙草屬(Nicotiana)植物中，是煙草體內的一種重要的次生代謝產物。煙草尼古丁的合成和轉運受到多個因素的調控，目前已經鑒別和克隆出來了一些尼古丁合成途徑中的關鍵基因，如QPT、PMT、MPO、JAZ、MYC2a等。

從分子生物學角度對尼古丁的合成代謝途徑研究尚未完全透徹。通過氯離子通道調控尼古丁合成基因，從而影響尼古丁含量的研究未見報道。尼古丁調控基因對于煙草商業生產至關重要，目前大多數的尼古丁合成基因相關專利都掌握在國外煙草公司手中。因此，研究尼古丁合成途徑相關調控基因對中國煙草企業改良煙草產品中尼古丁含量具有重要意義。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b，所述基因編碼一種調控煙草尼古丁含量的多肽，所述多肽包含的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示。

本發明的第二目的在于提供所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b包含的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。

本發明的第三目的在于提供一種所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的克隆方法，包括以下步驟：

（1）煙草葉片cDNA合成：提取煙草RNA，反轉錄得到第一鏈cDNA；

（2）NtCLC-b 基因的PCR擴增：以煙草葉片cDNA為模板，根據NtCLC-b基因序列設計引物，進行PCR擴增，回收和純化PCR擴增產物，并測序。

本發明的第四目的在于提供一種所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的應用，即在煙草植株體內過量表達所述NtCLC-b基因，可降低煙草中尼古丁的含量。

本發明的第五目的在于提供一種所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的重組載體。

本發明的第六目的在于提供一種所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的表達盒。

本發明的第七目的在于提供一種所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的轉基因細胞系。