[發明專利]一種煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b及其克隆方法與應用

有效

• 申請號: 201710803449.5
• 申請日: 2017-09-08
• 公開（公告）號: CN107365777B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 逄濤;白戈;楊大海;謝賀;李勇;姚恒;李永平;肖炳光;張誼寒;陳學軍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 謝喬良;方正巧

1.一種煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的應用，所述基因編碼一種調控煙草尼古丁含量的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示；其特征在于在煙草植株體內過量表達所述NtCLC-b基因能夠降低煙草中尼古丁的含量。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述煙草尼古丁含量調控基因NtCLC-b的克隆方法包括以下步驟：

（1）煙草葉片cDNA合成：提取煙草RNA，反轉錄得到第一鏈cDNA；

（2）NtCLC-b 基因的PCR擴增：以煙草葉片cDNA為模板，根據NtCLC-b基因序列設計引物，進行PCR擴增，回收和純化PCR擴增產物，并測序。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述引物為：

正向引物：5’- ATGGAGGAGCCAACTCGATTAGTAG -3’；

反向引物：5’- TCAGTTCCCCTTTTTACCGCTTTTTG -3’。

5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述過量表達NtCLC-b基因的方法包括植物病毒載體介導基因過表達，或農桿菌介導轉化過表達載體。