[發(fā)明專利]一種火麻仁蛋白水解物抗氧化活性的研究方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710795074.2
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107703079A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發(fā)明（設計）人: 薛峰;李璇;王身艷;王娟紅;孫鈺峰;陳昌暘
• 申請（專利權(quán)）人: 南京中醫(yī)藥大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 南京禾易知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司32320
• 代理人: 仇波

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及火麻仁蛋白質(zhì)的研究領(lǐng)域，特別涉及一種火麻仁蛋白水解物抗氧化活性的研究方法。

背景技術(shù)

火麻仁為桑科植物大麻的干燥成熟果實。別名又叫大麻仁、火麻、線麻子。火麻仁是典型的藥食同源物，在中國作為藥食同源已經(jīng)有3000年歷史，我國各地均有栽培，也有半野生者，廣泛分布于東北、華北、華東、中南等地。資源豐富，富含優(yōu)良的營養(yǎng)價值和具有多種多樣的藥理作用，具有較高的經(jīng)濟價值、醫(yī)用價值和開發(fā)應用前景。

火麻仁始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。其性味甘平，有潤腸通便之功效，麻仁養(yǎng)陰生津，臨床上用于治療血虛津虧，腸燥便秘等。現(xiàn)代研究表明，火麻仁中含有25%-35%油脂、20%-25%蛋白質(zhì)、20%-30%的膳食纖維，還含有豐富的維生素（VB、VE、VK）和礦物質(zhì)（Ca、Fe、Na、Mg、Zn）；有較好的降血壓、利尿、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗血栓形成的作用，長期食用，對慢性神經(jīng)炎、癱瘓、便秘、降血壓、降血脂、抗?jié)円约皨D科疾病具有很好的補助療效。

火麻仁蛋白是一種十分優(yōu)異的植物蛋白質(zhì)新來源，屬于易消化的膳食性蛋白質(zhì)，火麻仁蛋白質(zhì)含有以谷氨酸、組氨酸和精氨酸等為主的21種氨基酸，必需的氨基酸比例合理，屬于優(yōu)質(zhì)完全蛋白質(zhì)。經(jīng)臨床試驗證明，火麻仁蛋白質(zhì)具有提高耐缺氧、改善貧血等功效。但是火麻仁蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較緊密，溶解性較差，用酶直接對其進行水解比較難接觸其酶切位點，作為保健品其生物效價不理想，因此，改善火麻仁蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，有利于提高其營養(yǎng)和功能特性，增加其附加值。

目前，改善蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì)的方法有酶法水解、超高壓處理、熱誘導聚合、基因工程技術(shù)等，這些方法分別存在成本高、設備要求高、操作條件不易控制和技術(shù)周期長、見效慢等缺點。

因此，發(fā)明一種火麻仁蛋白水解物抗氧化活性的研究方法來解決上述問題很有必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種火麻仁蛋白水解物抗氧化活性的研究方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種火麻仁蛋白水解物抗氧化活性的研究方法，包括以下步驟：（1）火麻仁的脫脂；（2）火麻仁蛋白的制備；（3）高溫和超聲波的預處理；（4）酶解經(jīng)高溫和超聲波預處理的蛋白樣品；（5）清除DPPH自由基的能力；（6）總還原力測定；（7）清除羥基自由基HO·能力；（8）金屬離子螯合能力的測定；（9）ABTS陽離子自由基清除法測定；（10）統(tǒng)計分析。

優(yōu)選的，火麻仁的脫脂包括以下步驟，選取市售去殼火麻仁，將火麻仁置于干燥箱中60攝氏度干燥4小時，接著用粉碎機粉碎，過60目篩，過篩后的原料加入石油醚，機械攪拌2小時脫脂，離心收集沉淀備用，石油醚采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收。

優(yōu)選的，火麻仁蛋白的制備包括以下步驟，將脂后的火麻仁原料粉以1:10固液比分散在去離子水中，常溫攪拌1小時后，攪拌的過程中不斷加入1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8.5，用離心機4000rpm/min離心20min后分離去除沉淀，將所得溶液用1mol/L鹽酸調(diào)pH4.5，靜置5min后，用離心機4000rpm/min離心20min后分離出酸沉蛋白，用去離子水洗滌2次，使其在水中形成蛋白分散液，再用1mol/L氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0，將所得酸沉蛋白分散液經(jīng)冷凍干燥后即為火麻仁蛋白。

優(yōu)選的，高溫和超聲波的預處理包括以下步驟，將火麻仁蛋白分散在磷酸鹽緩沖溶液中配制成1%的蛋白溶液，攪拌使火麻仁蛋白完全溶解，然后使用超聲波細胞粉碎機對溶液進行處理，設置超聲強度分別為200w、400w、600w，超聲時間均為20min，超聲開時間2s，超聲關(guān)時間1s，此外設置一個對照樣本，常壓下高溫預處理，配制5%的蛋白溶液100℃水浴加熱30min，然后冷卻到室溫，高溫和超聲波預處理的樣品均凍干并儲存于干燥器中。

優(yōu)選的，酶解經(jīng)高溫和超聲波預處理的蛋白樣品包括以下步驟，定量稱取蛋白質(zhì)后用蒸餾水配制成5%的蛋白溶液，用0.5mol/L的氫氧化鈉將其pH值調(diào)節(jié)到9.0，用50℃水浴加熱，再加入堿性蛋白酶酶解，此過程中使用0.5mol/L氫氧化鈉溶液和0.1mol/L鹽酸溶液控制酶解液恒定的pH值，酶解6小時后反應結(jié)束，酶解物在100℃水中煮沸15min以使酶失活，冷卻至室溫，用1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH為4.5，然后用離心機4000r/min離心20min，收集上清液凍干備用。