[發明專利]檢測黃曲霉毒素B1的生物傳感分析儀酶電極及制備方法

在審

• 申請號: 201710780464.2
• 申請日: 2017-09-01
• 公開（公告）號: CN107727722A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 畢春元;高廣恒;張利群;朱思榮;趙曉華;張金玲;杜祎;史建國
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生物研究所
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 北京快易權知識產權代理有限公司11660
• 代理人: 陳伊雯

技術領域

本發明屬于生物傳感器領域，尤其涉及一種檢測黃曲霉毒素B1的生物傳感分析儀酶電極及制備方法。

背景技術

黃曲霉毒素是由黃曲霉菌屬的黃曲霉、特曲霉和寄生曲霉等產生的一類代謝產物，主要存在于霉變的玉米、谷物、堅果中，天然污染產生的黃曲霉毒素以黃曲霉毒素B1(AFB1)最為多見。AFB1因具有極強的毒性和致癌性，在極低的濃度下即可對人和動物造成巨大傷害，故研究食品中AFB1的檢測方法對食品安全具有重要意義。

目前黃曲霉毒素的檢測方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯免疫法等方法。

薄層層析法是檢測黃曲霉毒素的基本方法，但是該類測定方法有一定的局限性，若雜質的Rf值和黃曲霉毒素B1的Rf值一致時很容易導致測試結果發生較大偏差，因此該方法多用來測試黃曲霉毒素B1是否存在于樣品中。

高效液相色譜法和酶聯免疫法是目前用來對黃曲霉毒素定量的常用方法，該兩種方法較薄層層析法準確度和靈敏度都有所提升，但是該兩種方法操作復雜，分析速度慢，用到的儀器比較昂貴，而且現在無法避免假陽性對黃曲霉毒素檢測結果的影響。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種檢測黃曲霉毒素B1的生物傳感分析儀酶電極及制備方法。

一種檢測黃曲霉毒素B1的生物傳感分析儀酶電極，包括：過氧化氫電極及能夠貼合在電極表面的黃曲霉毒素氧化酶酶膜。

進一步，所述黃曲霉毒素氧化酶酶膜包括：交聯劑、載體、保護膜和黃曲霉毒素氧化酶；所述載體為一張圓形薄膜,所述交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶混勻后涂在載體上,再涂一層保護膜；

所述交聯劑為具有雙功能團結構的試劑；所述交聯劑用于作用在酶分子上，雙功能團結構在酶分子之間產生化學鍵，使酶分子相互連在一起，發生交聯，凝集成網狀結構；增強酶的穩定性，且多可反復多次使用。

所述交聯劑具有兩個醛基的戊二醛，在4℃～40℃，pH6.0～8.0的緩沖液中，用于與黃曲霉毒素氧化酶上的氨基發生脫水縮合反應使黃曲霉毒素氧化酶分子相互連在一起，形成空間網狀結構；從而達到固定化效果。戊二醛交聯反應可避免蛋白分子的三級結構發生改變，是最溫和的交聯反應之一。

所述載體為孔徑分布均勻的聚碳酸酯膜，孔徑為圓柱形的直通孔。

本發明的另一目的在于提供一種黃曲霉毒素氧化酶酶膜制備方法，包括以下步驟：

制備空膜圈；

將交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶混勻；

將混勻后的交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶涂抹在載體上；

自主裝保護膜；

干燥后，制得黃曲霉毒素氧化酶酶膜。

進一步，所述制備空膜圈，包括：

所述空膜圈的材料采用聚碳酸酯膜，用無水乙醇浸泡24小時后，取出晾干，再用65％的甲醛溶液浸泡2小時后，取出晾干，備用。

進一步，所述將交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶混勻中，交聯劑為戊二醛，濃度為3.1％；交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶的質量比例為10:3。

所述將混勻后的交聯劑與黃曲霉毒素氧化酶涂抹在載體上，涂抹層的厚度為0.5mm；

在最外層自主裝保護膜，保護膜的厚度為0.5mm，保護膜的作用為提高酶膜的抗干擾能力；

進一步，所述干燥，在烘箱內進行，時間為60分鐘，烘干溫度為37℃。

進一步，所述電極為過氧化氫電極，所述電極的制備方法包括以下步驟：

鉑金絲處理；

銀絲處理；

制作電極套并填充。

進一步，鉑金絲處理中，鉑金絲純度0.9999；具體包括：

將鉑金絲截成φ1mm，長1cm的小段，擦拭干凈，除去表面雜質，然后在98％的濃硫酸中浸泡24小時后，取出晾干，再用65％的甲醛溶液浸泡2小時后，取出晾干后拋光，作為過氧化氫電極的陽電極。

進一步，銀絲處理中，銀絲純度0.9999；具體包括：

將銀絲裁成φ1cm，厚1mm的薄片，在薄片中間留有φ1mm的圓孔，擦拭干凈，除去表面雜質，然后在98％的濃硫酸中浸泡24小時后，取出晾干，再用65％的甲醛溶液浸泡2小時后，取出晾干后拋光，作為過氧化氫電極的陰電極；

進一步，所述制作電極套并填充中，

電極套材料采用四氟，將四氟片卷成φ1cm的圓筒，截取長度

1.5cm，備用；