[發明專利]一種肺基質水凝膠的制備方法及應用及藥物

在審

• 申請號: 201710775034.1
• 申請日: 2017-08-31
• 公開（公告）號: CN107496459A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 周菁;孫紅玉;肖貞良;田坤;陳章;連亨寧;胡繩;李志偉;馬李杰
• 申請（專利權）人: 周菁
• 主分類號: A61K35/42
• 分類號: A61K35/42;A61K9/06;A61P1/18;A61P11/00;A61L27/52;A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙)51224
• 代理人: 陳錢

技術領域

本發明涉及組織工程與再生醫學技術領域，具體涉及一種肺基質水凝膠的制備方法及應用及藥物。

背景技術

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是臨床常見的急腹癥之一，病死率高。AP發生時，胰酶在腺泡細胞內異常激活并釋放炎性介質，進而激活大量的炎性細胞，引起體內炎癥“瀑布樣反應”，導致多器官功能衰竭。在炎性介質的作用下，肺泡上皮-內皮細胞屏障功能受損，循環中的蛋白、液體、中性粒細胞等成分進入肺泡腔，肺泡結構破壞，換氣功能受損，發生胰腺炎相關肺損傷(pancreatitis associated lung injury,APALI)。APALI是AP早期嚴重的并發癥，也是導致AP早期死亡的重要原因。

既往研究證實，肺泡上皮細胞過度凋亡在APALI的病情發生、進展中扮演著至關重要的角色。生理情況下，細胞適度凋亡對于維持內環境穩定具有重要的意義。然而，在炎性環境等病理狀態下，肺泡上皮細胞周圍微環境失衡，細胞發生過度凋亡。肺泡上皮細胞的大量凋亡導致肺組織結構和功能的破壞加重。因此，如果能夠抑制APALI中肺泡上皮細胞的過度凋亡，可以減輕肺損傷，保護肺功能。

目前，已有使用藥物調控APALI中肺泡上皮細胞的凋亡成功治療APALI的動物實驗研究報道。但是，由于動物實驗中采用的凋亡抑制藥物副作用大，選擇性差，無法直接在患者中使用，目前臨床上尚無針對肺泡上皮細胞過度凋亡切實有效的治療藥物。因此，尋找一種安全、有效、簡便的調控肺泡上皮細胞過度凋亡功能策略，恢復受損的肺組織功能，已成為臨床上亟需解決的問題。

發明內容

本發明提供了一種肺基質水凝膠的制備方法及應用及藥物，旨在解決現有技術中采用藥物等調控APALI中肺泡上皮細胞的凋亡過程副作用大、選擇性差的問題。

為了解決以上技術問題，本發明通過以下技術方案實現：

一種肺基質水凝膠的制備方法，將大鼠脫細胞肺組織粉碎，然后按照8mg/ml-12mg/ml比例加入鹽酸-胃蛋白酶溶液中，進行溶解。向溶解后的溶液中加入0.05M-0.15M氫氧化鈉和8×PBS-12×PBS調至生理狀態，然后置于30℃-40℃條件下直至形成膠狀的肺基質水凝膠。

進一步，大鼠脫細胞肺組織的制備方法如下：

1)將大鼠全麻后，向全身灌注肝素，取大鼠完整的心肺組織。

2)將套管針經右心室插入肺動脈并固定，設置蠕動泵速度為4-6ml/分鐘，使用0.1％十二烷基硫酸鈉預充整個灌注管道。

3)依次采用0.1％十二烷基硫酸鈉灌注1.8-2.2h，采用去離子水灌注14-16分鐘，采用1％Triton X-100溶液灌注8-12分鐘，采用添加雙抗的PBS灌注70-74小時，直至心肺組織透明，并去除殘余的洗滌劑，得到大鼠脫細胞肺組織。

進一步，將大鼠全麻后，采用腹主動脈插管并使用50單位/毫升的肝素向全身灌注。

進一步，蠕動泵采用卡片式蠕動泵，蠕動泵以5ml/分鐘的速度將0.1％十二烷基硫酸鈉預充整個灌注管道。

進一步，依次采用0.1％十二烷基硫酸鈉灌注2h，去離子水灌注15分鐘，1％Triton X-100溶液灌注10分鐘，添加雙抗的PBS灌注72小時，直至組織透明。

進一步，去除殘余的洗滌劑步驟為：采用Dnase溶液灌洗1次后，用生理鹽水漂洗3-5次。

進一步，大鼠脫細胞肺組織粉碎步驟為：將大鼠脫細胞肺組織低溫凍干后，再用粉碎機磨成粉末。

進一步，大鼠脫細胞肺組織粉末按照10mg/ml比例加入鹽酸-胃蛋白酶溶液中，室溫緩慢攪拌至溶解狀態，通過加入0.1M氫氧化鈉和10×PBS調至Ph 7.4，并置于37℃直至形成膠狀的肺基質水凝膠。

一種采用上述肺基質水凝膠的制備方法制作的肺基質水凝膠在治療重癥急性胰腺炎肺損傷中的應用。

一種治療重癥急性胰腺炎肺損傷藥物，包括上述肺基質水凝膠的制備方法制作的肺基質水凝膠。

與現有技術相比本發明的優點是：

本發明制備的肺基質水凝膠不但具有溫敏性、便于使用、低免疫原性及能提供最天然的細胞外微環境等優點，而且操作工藝簡單、實施條件溫和，為肺組織工程提供了一種新型水凝膠材料。該材料適宜于肺泡上皮細胞的恢復，可抑制肺泡上皮細胞在病理情況下的過度凋亡，進而促進重癥胰腺炎相關肺損傷的內源性修復，采用本發明方法制備的肺基質水凝膠在用于治療重癥急性胰腺炎相關肺損傷的藥物時，對調控APALI中肺泡上皮細胞的凋亡過程基本無副作用。