[發(fā)明專利]一種蝦蟹類富水性組織的石蠟切片制作方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710768140.7
• 申請日: 2017-08-31
• 公開（公告）號: CN107389412B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發(fā)明（設計）人: 王慧;朱鵬;孫姚佳代
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 高強

本發(fā)明涉及一種蝦蟹類富水性組織的石蠟切片制作方法；常規(guī)的石蠟組織切片方法指標對于組織形態(tài)難固定、質(zhì)地柔軟、富水性的蝦蟹類組織器官缺乏組織區(qū)分度，易造成組織破碎、重疊、折曲，嚴重影響組織的顯微觀察效果，難以獲得理想清晰的組織結(jié)構(gòu)。本發(fā)明通過對樣品的負壓、固定和包埋處理進而定型組織、延展組織避免褶皺重疊和因富水性組織的彈性而存在誤差。本發(fā)明操作簡便、可行性強、周期短，對于組織形態(tài)難固定、質(zhì)地柔軟、富水性的蝦蟹類組織器官具有很好的組織區(qū)分度，可以實現(xiàn)完整的組織形態(tài)的石蠟切片觀察，能滿足研究人員對切片組織觀察的全部要求。

技術領域

本發(fā)明涉及一種蝦蟹類富水性組織的石蠟切片制作方法，屬于顯微組織切片技術領域。

背景技術：

蝦蟹類組織石蠟切片技術是研究動物組織形態(tài)和病理學變化的一種重要技術。由于蝦蟹類是水生動物，其各種組織器官的含水量較高，尤其是經(jīng)常作為病理學研究依據(jù)的鰓組織和肝胰腺(中腸腺)組織。近年來，對蝦蟹類以上兩種組織開展研究過程中取材量大、試劑用量較多，出于經(jīng)濟考慮，傳統(tǒng)技術仍作為廣泛使用技術。技術一般包括取材及固定、流水沖洗、組織脫水、組織透明、滲蠟包埋、切片展片、脫蠟和HE染色、光鏡顯微觀察等步驟。而常規(guī)的方法指標對于組織形態(tài)難固定、質(zhì)地柔軟、富水性的蝦蟹類組織器官缺乏組織區(qū)分度，易造成組織破碎、重疊、折曲，嚴重影響組織的顯微觀察效果，難以獲得理想清晰的組織結(jié)構(gòu)。本發(fā)明旨在彌補現(xiàn)有方法在處理蝦蟹類等富水性動物及其組織的技術不足，以獲得理想的組織器官石蠟切片圖像。

發(fā)明內(nèi)容：

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種蝦蟹類富水性組織的石蠟切片制作方法。

一種蝦蟹類組織的石蠟切片制作方法，步驟如下：

1、將樣品組織放于組織固定液中，立即負壓固定，負壓至樣品組織塊膨脹飽滿、不再產(chǎn)生氣泡；再立即加入到盛有相同濃度的組織固定液的適宜體積的離心管中，離心管中組織固定液的量與樣品組織體積之比為20：1；避免組織塊貼于容器壁上，室溫(20—25℃)恒溫固定4-6h；所述負壓的壓力值為-1.25kpa；負壓容器總?cè)莘e(V₁)：容器中組織固定液總體積(V₂):樣品組織體積(V₃)＝6:3:1；

所述組織固定液為溶質(zhì)質(zhì)量分數(shù)2.5％的多聚甲醛溶液；多聚甲醛溶液具體制備方法為：取多聚甲醛50g，1×PBS緩沖溶液900ml，加水至1000ml，混合后60℃下水浴24h，若還有未溶解的多聚甲醛，滴加1-2滴1當量(1mol/L)的NaOH溶液，調(diào)節(jié)PH為6.8-7.2，4℃下保存；

所述1×PBS緩沖溶液(0.01M)的組份為：Na₂HPO₄ 8mM，NaCl 136mM，KH₂PO₄ 2mM，KCl 2.6mM，PH＝7.2-7.4；

所述1當量(1mol/L)的NaOH溶液為：稱取NaOH固體粉末10g，用250mL的容量瓶配置成250mL、1mol/L的NaOH溶液。

2、將步驟1)固定后的樣品組織放入包埋盒中，用流動清水不間斷流動沖洗包埋盒24h；洗除樣品組織中殘留的固定液；沖洗完畢后用擦鏡紙包好。

3、對沖洗完畢的樣品組織在常溫(25℃左右)下，依次用梯度濃度為30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的乙醇溶液脫水處理；濃度為30％的乙醇溶液脫水處理時間分別為4h-5h；濃度為40％、50％、60％、70％的乙醇溶液脫水處理時間分別為40min-1h，濃度為80％、90％、100％的乙醇脫水處理時間分別為15min-35min；當乙醇溶液濃度≤70％時，所述乙醇溶液與樣品組織的體積比為50:1；當乙醇溶液濃度≥70％時，所述乙醇溶液與樣品組織的體積比為35:1；脫水處理完成后將裝有樣品組織的包埋盒從無水乙醇溶液中取出。

4、將步驟3)中取出的包埋盒放入透明劑中進行透明處理。