[發明專利]一種利用多色熒光碳點同時且可視化檢測多種抗生素的方法及多種抗生素的熒光檢測指示卡

有效

• 申請號: 201710762943.1
• 申請日: 2017-08-30
• 公開（公告）號: CN107607502B
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 鄒小波;胡雪桃;石吉勇;史永強;張文;黃曉瑋;李志華;徐藝偉
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用多色熒光碳點同時且可視化檢測多種抗生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、n種熒光碳點的制備

將一定量的L-半胱氨酸和NaOH分別加入到聚乙二醇中，混合均勻后加熱不同的時間T₁，T₂，T₃……，T_n；將加熱T₁時間的混合液經過分離過程，將熒光碳點純化，得到了發射波長分別為λ₁的熒光碳點E₁；將加熱T₂時間的混合液經過分離過程，將熒光碳點純化，得到了發射波長分別為λ₂的熒光碳點E₂；同理，可得到發射波長為λ₃，λ₄，……，λ_n的熒光碳點，分別命名為E₃，E₄，……，E_n；實現了發射波長為λ₁，λ₂，λ₃，……，λ_n n種熒光碳點E₁，E₂，E₃，……，E_n的制備；

S2、檢測n種抗生素熒光探針的制備

首先調整n種熒光碳點pH值，并加入一定量的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺活化熒光碳點表面的羧基；再將活化后的熒光碳點E₁與抗生素K₁的適配體混合并在室溫下不斷攪拌反應一定時間，通過離心洗滌將混合液中未結合的熒光碳點E₁或者適配體A₁除去，得到了熒光碳點E₁修飾的抗生素適配體A₁，即檢測抗生素K₁的熒光探針P₁；將活化后的熒光碳點E₂與抗生素K₂的適配體混合并在室溫下不斷攪拌反應一定時間，通過離心洗滌將混合液中未結合的熒光碳點E₂或者適配體A₂除去，得到了熒光碳點E₂修飾的抗生素適配體A₂，即檢測抗生素K₂的熒光探針P₂；……；將活化后的熒光碳點E_n與抗生素K_n的適配體混合并在室溫下不斷攪拌反應一定時間，通過離心洗滌將混合液中未結合的熒光碳點E_n或者適配體A_n除去，得到了熒光碳點E_n修飾的抗生素適配體A_n，即檢測抗生素K_n的熒光探針P_n；

熒光碳點E₁與適配體A₁合成了檢測抗生素K₁的熒光探針P₁，熒光碳點E₂與適配體A₂合成了檢測抗生素K₂的熒光探針P₂，熒光碳點E₃與適配體A₃合成了檢測抗生素K₃的熒光探針P₃，……，熒光碳點E_n與適配體A_n合成了檢測抗生素K_n的熒光探針P_n；實現了n種抗生素熒光探針P₁，P₂，P₃，……，P_n的制備；

S3、檢測n種抗生素熒光指示卡的建立

利用熒光探針P_i，建立檢測抗生素K_i的熒光指示卡，其中i＝1，2，3，……， n；將不同濃度的抗生素K₁，其中濃度分別為C₁，C₂，C₃，……，C_f共f個濃度，分別加入到熒光探針P₁中，利用熒光成像技術得到了抗生素K₁濃度分別為C₁，C₂，C₃，……，C_f的熒光圖片，根據抗生素濃度由小到大排列f幅熒光圖片，組成了檢測抗生素K₁的熒光指示卡，共包含f幅熒光圖片；同理，可得到檢測抗生素K₂，K₃，……，K_n的熒光指示卡；

S4、n種抗生素定量預測模型的建立

提取檢測抗生素K₁熒光指示卡第1，2，3，……，f幅熒光圖片的RGB值，構成檢測抗生素K₁熒光指示卡RGB值矩陣Z_K1的第1，2，3，……，f行；同理，抗生素K₂，K₃，……，Kn熒光指示卡熒光圖片的RGB值分別構成陣列Z_K2，Z_K3，……，Z_Kn；每個陣列大小都是f×3，f代表了抗生素熒光指示卡包含的圖片數，3代表了3個變量，即R，G，B的值；

分別以檢測抗生素K₁熒光指示卡RGB值矩陣Z_K1為自變量，濃度列向量C＝[C₁，C₂，C₃，……，C_f]’為因變量，建立多元線性回歸定量預測模型，得到檢測抗生素K₁的定量預測模型M₁；同理可得檢測抗生素K₂，K₃，……，K_n的定量預測模型M₂，M₃，M₄，……，M_n；建立了抗生素K₁，K₂，K₃，……，K_n的定量預測模型M₁，M₂，M₃，M₄，……，M_n；

S5、食品中n種抗生素的同時檢測

將食品待測液分別加入到熒光探針P₁，P₂，P₃，……，P_n中，分別得到檢測食品中抗生素K₁，K₂，K₃，……，K_n的n幅熒光圖片；第1幅熒光圖片為含有熒光探針P₁、檢測抗生素K₁的熒光圖片，第2幅熒光圖片為含有熒光探針P₂、檢測抗生素K₂的熒光圖片，……，第n幅熒光圖片為含有熒光探針P_n、檢測抗生素K_n的熒光圖片；分別提取第1，2，3，……，n幅熒光圖片的RGB值，分別構成了矩陣Z_s的第1，2，3，……，n行；

通過觀察檢測食品中抗生素K₁，K₂，K₃，K_n的熒光圖片，發現抗生素K₁，K₂，K₃，……，K_n的含量分別介于C_i-C_i+1之間，其中i＝1，2，3，……，f-1；

將矩陣Zs的第1，2，3，……，n行分別代入檢測抗生素K1的模型M1，抗生素K2的模型M2，抗生素K3的模型M3，……，抗生素K_n的模型M_n中，得到的h₁，h₂，h₃，……，h_n分別構成了含量矩陣H的第1，2，3，……，n行；第一行h₁代表的是食品中抗生素K₁的含量，第二行h₂代表的是食品中抗生素K₂的含量，第三行h₃代表的是食品中抗生素K₃的含量，……，第n行h_n代表的是食品中抗生素K_n的含量；實現了食品中多種抗生素含量的快速和同時檢測。