[發明專利]一種從鹿仙草中提取制備蛇菰素的方法

有效

• 申請號: 201710755557.X
• 申請日: 2017-08-29
• 公開（公告）號: CN107459548B
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 何進;蔡群虎;高嶷;普代有
• 申請（專利權）人: 云南養尊堂生物科技有限公司
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 53106 昆明大百科專利事務所
• 代理人: 蘇蕓蕓<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明公開了一種從鹿仙草中提取制備蛇菰素的方法，該方法用甲醇回流提取鹿仙草，提取液濃縮后乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯萃取物濃縮回收后，浸膏用甲醇溶解石油醚萃取，取甲醇層過堿性氧化鋁柱脫去酚性成分，再經硅膠柱層析，氯仿甲醇洗脫得到蛇菰素A、蛇菰素B，甲醇水結晶得到高純度單體化合物；本發明方法采用溶劑萃取去除大量雜質，提高了上樣樣品中目標物含量，為后續柱層析過程中節省了柱層析填料用量和洗脫溶劑，不需反復柱層析減少了過柱過程中對目標物的死吸附量，最大限度節約了時間和溶劑，大大提高制備效率，降低了成本，且提取時間短、提取率高，實現了大量、快速、低成本、高效的制備。

技術領域

本發明屬于植物活性成分提取領域，具體涉及一種從鹿仙草中提取制備蛇菰素的方法。

背景技術

鹿仙草（Balanophora involucrata Hook.f.）為蛇菰科蛇菰屬植物，別名蛇菰，蛇菰為寄生性草本植物，退化較強、一年或多年生，生長季節性強，生長期短，故資源稀少。鹿仙草資源分布：分布于福建、湖北、廣東、廣西、四川、云南等地；具有壯陽補腎，理氣健脾，止血生肌，清熱解毒的功效；民間常用于治療陽痿，慢性肝炎，消化道出血，月經過多，遺精，腫瘤等癥。

鹿仙草主含化學成分為三萜類、甾醇類、多酚類；其中鹿仙草蛇菰素具有良好的抗腫瘤活性。1919年Simon等人從蛇菰中分離出蛇菰素；1998年，劉錫葵等人正式提出蛇菰素分為蛇菰素A(balanophorin A)和蛇菰素B(balanophorin B)。在抗肝損傷藥物研究中已經證明了蛇菰素具有較強的保肝活性。蛇菰素有修復酒精性肝損害作用，具有解酒毒作用。在抗腫瘤方面，鹿仙草蛇菰素對小鼠實體型肝腫瘤H22具有良好的抗腫瘤活性；其作用機理為蛇菰素與肝癌細胞內的DNA、蛋白質相作用，從而誘導肝癌細胞凋亡。國藥準字Z20025653鹿仙草顆粒對肝癌細胞的生長有顯著的抑制作用、對人體毒副作用低，用于對肝癌的治療。

蛇菰屬植物屬于天然藥物，療效好且對人體的毒副作用小，堪稱綠色療法，所以，深入研究該屬植物對于今后在抗肝炎，抗腫瘤方面的臨床應用有著積極的意義。另外，蛇菰屬植物在我國分布較廣，具有較好的開發利用價值。

鹿仙草蛇菰素護肝和治療肝病方面有重要的作用，對人體的副作用小，值得進一步的研究與開發。文獻對鹿仙草的活性成分及藥理作用方面的研究較多，很少涉及到對鹿仙草活性成分蛇菰素提取及純化研究，大多報道僅是提取粗提物，比如乙酸乙酯或氯仿提取物，未對粗提物中主要活性成分蛇菰素的分離純化方法深入研究，且粗提方法簡單、單一，普遍存在提取率偏低，蛇菰素純度不高的缺點。

發明內容

針對現有技術的不足和缺陷，本發明提供了一種從鹿仙草中提取制備蛇菰素的方法，該方法具體步驟如下：

（1）鹿仙草粉碎、粗提

A、將鹿仙草粉碎至60-100目；

B、在粉碎后的鹿仙草中加入體積濃度80-95%的甲醇溶液進行回流提取，提取2-4小時，過濾得提取液，藥渣再加入體積濃度80-95%的甲醇溶液回流提取1-2小時，過濾得二次提取液，合并提取液，50-60℃下真空濃縮回收甲醇，得粗膏；

（2）粗膏萃取處理

A、在粗膏中加入其質量2-3倍的乙酸乙酯萃取，萃取2次，合并2次萃取所得乙酸乙酯相，50-60℃下真空濃縮回收乙酸乙酯，得到浸膏；

B、將浸膏用其質量3-4倍的甲醇溶解后，加入等體積甲醇量的石油醚溶液萃取，棄石油醚層，萃取2-3次，合并得到甲醇萃取層；

（3）氧化鋁過柱去除酸性酚類雜質

取堿性氧化鋁進行干法裝柱，將甲醇萃取層過堿性氧化鋁柱，吸附去除甲醇萃取物中酚酸類成分，收集流出液，50-60℃下真空濃縮，得蛇菰素粗品浸膏；

（4）硅膠柱精分