[發(fā)明專利]用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710740421.1
• 申請日: 2017-08-25
• 公開（公告）號(hào): CN107326091B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘彩虹;黃宏文;張瓊;張鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院武漢植物園
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物及應(yīng)用。本發(fā)明提供的分子標(biāo)記引物為Geo168?F:AAAATCTTACAAAAATATGCCGA和Geo168?R:TGATTTTCACGGGACTCTGC，利用該引物，可準(zhǔn)確區(qū)分鑒定獼猴桃磨山系列雄性品種，還可區(qū)分除磨山系列雄性品種之外的其他品種，具備鑒定的普適性，適合大規(guī)模推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物及應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，我國獼猴桃產(chǎn)業(yè)穩(wěn)步擴(kuò)增，截至2016年全國栽培面積達(dá)220萬畝，產(chǎn)量260萬噸，產(chǎn)值超過200億元。獼猴桃屬于雌雄異株類型，即雌花中花粉敗育，而雄花中子房發(fā)育不完全且胚珠敗育。因此，在獼猴桃育種及商業(yè)果園栽培中，通常需選擇優(yōu)良雄株的花粉，進(jìn)行異花授粉，才能實(shí)現(xiàn)獼猴桃結(jié)實(shí)。

近年來，中國科學(xué)院武漢植物園選育的‘磨山’雄性系列獼猴桃品種(即‘磨山雄1號(hào)’、‘磨山雄2號(hào)’、‘磨山雄3號(hào)’、‘磨山4號(hào)’和‘磨山雄5號(hào)’)，具有花期覆蓋廣、花量大、花粉萌發(fā)率高等特點(diǎn)，已成為多個(gè)優(yōu)異獼猴桃品種的配套授粉雄株。例如‘磨山雄2號(hào)’獼猴桃不僅能給早花期和中花期的中華獼猴桃授粉，而且能促進(jìn)紅心系列獼猴桃果實(shí)品質(zhì)改善，增加內(nèi)果皮紅色積累。目前，對‘磨山’系列品種的鑒定僅通過樹勢、葉片形態(tài)、花期和花形態(tài)等傳統(tǒng)手段，難免受到環(huán)境和其他人為因素的影響。對‘磨山’系列品種鑒定的不確定性，給獼猴桃育種工作造成較大的困難，且混雜或者錯(cuò)誤的雄性品種也必定會(huì)影響果實(shí)生產(chǎn)和果品質(zhì)量。

分子標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用為品種鑒定提供了客觀和準(zhǔn)確的手段。分子標(biāo)記技術(shù)通過檢測生物個(gè)體在基因組上產(chǎn)生的變異，從而對不同個(gè)體進(jìn)行區(qū)分，是繼形態(tài)標(biāo)記和生化標(biāo)記之后，發(fā)展的一種較為理想的遺傳標(biāo)記。在植物種質(zhì)資源鑒定及育種中，對分子標(biāo)記的應(yīng)用已日趨成熟。RAPD分子標(biāo)記多態(tài)頻率高、特異性強(qiáng)，廣泛用于小麥、水稻和玉米等禾本科植物的種質(zhì)鑒定。SSR分子標(biāo)記等位變異高且穩(wěn)定性好，已應(yīng)用于大豆、蘋果和葡萄等資源鑒定研究。SNP分子標(biāo)記多態(tài)性高且分布廣，適合進(jìn)行品種鑒定和分類研究。在獼猴桃中，已開發(fā)SNP分子標(biāo)記對獼猴桃糖、酸以及果實(shí)大小等重要農(nóng)藝性狀進(jìn)行分子輔助育種。然而，對獼猴桃雄性系列品種的分子標(biāo)記鑒定研究尚未開展。

開發(fā)適用于雄性獼猴桃品種的分子鑒定標(biāo)記，能有針對性的選配雜交父本，有利于提高對獼猴桃的育種效率，提升獼猴桃產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于利用分子標(biāo)記技術(shù)，提供一種用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物，所述的分子標(biāo)記命名為Geo168，針對其設(shè)計(jì)的引物為Geo168-F:AAAATCTTACAAAAATATGCCGA和Geo168-R:TGATTTTCACGGGACTCTGC。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供了用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物在獼猴桃育種中的應(yīng)用。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：

用于獼猴桃磨山系列雄性品種鑒定的分子標(biāo)記Geo168引物的獲得：申請人從獼猴桃基因組序列網(wǎng)站(http://bioinfo.bti.cornell.edu/kiwi)下載‘紅陽’獼猴桃全基因序列。在全基因組范圍內(nèi)挖掘不同重復(fù)單元SSR位點(diǎn)，比對基因結(jié)構(gòu)注釋結(jié)果，選擇在基因區(qū)間的SSR位點(diǎn)設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物。利用設(shè)計(jì)合成的引物，對獼猴桃‘磨山’系列品種進(jìn)行PCR擴(kuò)增，篩選得到分子標(biāo)記Geo168，針對其設(shè)計(jì)的引物為Geo168-F:AAAATCTTACAAAAATATGCCGA和Geo168-R:TGATTTTCACGGGACTCTGC。