[發明專利]一種基于草酸銀橋聯三聯吡啶釕納米復合物的電化學發光傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201710738907.1
• 申請日: 2017-08-25
• 公開（公告）號: CN107543851B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 朱文娟;魏琴;范大偉;張勇;孫旭;匡軒;鞠熀先
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/543;G01N33/68;B82Y15/00
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1.一種基于草酸銀橋聯三聯吡啶釕納米復合物的電化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟如下：

（1）金功能化氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料的制備

將60~100mg硝酸銀，0.5~2g聚乙烯吡咯烷酮和1~10mg氧化石墨烯溶于20mL超純水中，向溶液中逐滴加入10~30mL濃度為0.05mol/L的碳酸氫鈉溶液，室溫下持續攪拌1h，離心分離，分別用水和乙醇洗3次，制得氧化石墨烯-碳酸銀納米復合材料；

將10~70mg氧化石墨烯-碳酸銀納米復合材料分散于20mL乙二醇中，超聲4h，得到溶液A，將50~300mg草酸和1~5mL濃度為1mmol/L的三聯吡啶釕溶液溶于20mL乙二醇中，得到溶液B，將溶液A逐滴加入到溶液B，持續攪拌1h，將其離心分離得到產物，分別用超純水和乙醇洗3次，制得氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料；

將50~200mg氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料分散于20mL超純水中，超聲4h，得到溶液C，將1~7mL質量分數為2%的氯金酸溶液，1~10mg聚乙烯吡咯烷酮和1~3mL質量分數為5%的檸檬酸鈉溶液混合，得到溶液D，攪拌下將溶液D逐滴加入到溶液C中，然后向混合溶液中加入1~5mg硼氫化鈉，混合溶液變成暗紅色，持續攪拌3~10h，離心分離，制得金功能化氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料；

（2）四氧化三鐵@聚多巴胺核殼復合材料標記的N末端B型利鈉肽原抗體溶液的制備

將50~200mg四氧化三鐵納米粒子和100~300mg多巴胺加入到120mL、pH為8.8的三羥甲基氨基甲烷緩沖液和50~200mL異丙醇的混合溶液中，持續攪拌20~50h，溶液變成黑色，離心分離，用超純水洗滌5次，將黑色產物置于35oC真空干燥箱中干燥，制得四氧化三鐵@聚多巴胺核殼復合材料；

將0.5~2mL濃度為10μg/mL的N末端B型利鈉肽原檢測抗體溶液加入到1~3mL濃度為10mg/mL四氧化三鐵@聚多巴胺核殼復合材料溶液，4oC下攪拌48h，離心分離，將固體產物重新分散于1mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，制得四氧化三鐵@聚多巴胺核殼復合材料標記的N末端B型利鈉肽原抗體溶液；

（3）電化學發光傳感器的制備

1）玻碳電極經Al₂O₃粉打磨至鏡面，用超純水徹底清洗干凈；

2）將6μL濃度為3~10mg/mL的金功能化氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料溶液滴加到電極表面，4oC下干燥；

3）繼續滴加6μL濃度為6~12μg/mL的N末端B型利鈉肽原捕獲抗體溶液于修飾電極表面，4oC保存至干燥；

4）繼續滴加3μL質量分數為0.5~1%的牛血清白蛋白溶液，以封閉電極表面的非特異性活性位點，用pH為7.4的PBS溶液沖洗電極表面，4oC晾干；

5）分別滴加6μL不同濃度的N末端B型利鈉肽原抗原于修飾電極表面，4oC下孵化20~40min，用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面，4oC晾干；

6）將6μL濃度為5~15mg/mL的四氧化三鐵@聚多巴胺核殼復合材料標記的N末端B型利鈉肽原抗體溶液修飾在電極上，室溫下孵化30~60min，用pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液沖洗電極表面，4oC晾干，制得一種夾心型電化學發光傳感器。

2.根據權利要求1所述的基于草酸銀橋聯三聯吡啶釕納米復合物的電化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，所述金功能化氧化石墨烯-草酸銀/三聯吡啶釕納米復合材料，草酸銀/三聯吡啶釕是通過草酸銀與三聯吡啶釕配位作用制得。

3.根據權利要求1所述的制備方法制備的一種基于草酸銀橋聯三聯吡啶釕納米復合物的電化學發光傳感器作為N末端B型利鈉肽原檢測的應用。

4.根據權利要求3所述的電化學發光傳感器作為N末端B型利鈉肽原檢測的應用，其特征在于，檢測步驟如下：

（1）將電化學發光傳感器為工作電極，Ag/AgCl電極作為參比電極，鉑絲電極為對電極，使用10mL、pH為6.0~8.4的含40~140mmol/L過硫酸鉀溶液電解質溶液，制備電化學工作站，并將其和化學發光檢測儀連接在一起進行測試；

（2）化學發光檢測儀參數設置：光電倍增管的高壓設置為900V，掃描速率為0.1V/s；

（3）電化學工作站參數設置：循環伏安掃描電位范圍為-1.6V~0V，掃描速率為0.1V/s；

（4）將待測樣品溶液代替N末端B型利鈉肽原抗原進行檢測。