[發明專利]用于乳腺癌早中期快速診斷化學發光試劑盒

在審

• 申請號: 201710724133.7
• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107703303A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 余躍飛
• 申請（專利權）人: 廣州恒泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京萬貝專利代理事務所(特殊普通合伙)11520
• 代理人: 陳領

技術領域：

本發明涉及癌癥診斷檢測用的試劑盒領域，具體為一種用于乳腺癌早中期快速診斷化學發光試劑盒。

背景技術：

乳腺癌是全世界女性最常見的癌病，世界上每年約有50萬人死于乳腺癌。在歐美國家，平均每四個女性癌癥患者中就有一個罹患的是乳腺癌，可見患病率是極高的。東方女性的好發病年齡多發生在 40～50歲，而西方女性的多好發病年齡在30～40歲。據統計，近年我國乳腺癌發病率的增長速度高出高發國家1～2個百分點。據國家癌癥中心和衛生部疾病預防控制局2012年公布的數據顯示：全國腫瘤登記地區乳腺癌發病率位居女性惡性腫瘤的第1位，乳腺癌已成為當前社會的重大公共衛生問題。臨床治療發現，第一期乳腺癌治療后的存活率達百分之八十，零期乳腺癌治療后的存活率更接近百分之百，因此早期發現及治療非常重要。

腫瘤標志物(tumor markers，TM)是指在腫瘤發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身合成、釋放，或由機體對腫瘤細胞反應而產生的標志腫瘤存在和生長的一類物質。這些物質在正常成人中不存在或者是在癌癥患者中出現的水平顯著高于正常人。目前腫瘤標志物檢測技術被認為是早期發現無癥狀微灶腫瘤的唯一途徑，這一檢測技術可先于X光片、超聲、CT、MRI或PET-CT等物理檢查發現腫瘤?？捎糜诟呶Ｈ巳簮盒阅[瘤的篩查，腫瘤診斷與鑒別診斷，評估治療的效果，預測或監視腫瘤復發或轉移。目前，醫院出現的乳腺癌診斷試劑盒都是檢測一些常見的腫瘤標記物，靈敏性及準確性都偏低。因主要是選定的腫瘤標記物單項檢測往往有很大的局限性，難以滿足早期快速診斷的要求。

目前，市場上還沒有針對乳腺癌的快速高效診斷試劑盒問世，嚴重影響到乳腺癌早期發現及治療。

發明內容：

本發明的目的是針對以上述現有乳腺癌診斷存在的不足，提供一種靈敏度高、準確性強且使用方便高效的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發光試劑盒。

為了實現本發明目的，本發明采取的技術方案是：用于乳腺癌早中期快速診斷化學發光試劑盒，腫瘤標記物組分為：半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺酰基Β－羥化酶。

所述試劑盒包括腫瘤標記物標準品、腫瘤標記物單克隆捕獲抗體包被的微孔板、辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記的腫瘤標記物單克隆檢測抗體、化學發光底物液和濃縮洗滌液。

所述辣根過氧化物酶的化學發光底物液包含A液和B液，其中A 液/B液使用時需要1:1混合。

所述堿性磷酸酶的化學發光底物液為金剛烷及其增強劑。

所述腫瘤標記物分別制得的單克隆抗體作為捕獲抗體。

所述腫瘤標記物分別制得的HRP標記后的多克隆抗體作為檢測抗體。

所述捕獲抗體的制備方法包括的步驟如下：

(1)抗原的制備：把半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺?；ⅲu化酶基因克隆到原核或真核表達載體，實現蛋白的表達純化后得到抗原；是為腫瘤標記物校準品。

(2)捕獲抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的單克隆抗體為捕獲抗體。

所述檢測抗體的制備方法包括的步驟如下：

(1)抗原的制備：把半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺酰基Β－羥化酶基因克隆到原核或真核表達載體，實現蛋白的表達純化后得到抗原；是為腫瘤標記物校準品。

(2)檢測抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的單克隆抗體，再經辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記為檢測抗體。

所述捕獲抗體預先包被于微量滴定板的孔內。采用生物素一鏈親合素系統包被抗體。

所述辣根過氧化物酶化學發光底物液包含A液和B液，其中，化學發光底物液A液，包括13mM魯米諾、0.6mM 4-羥基聯苯、0.1mM 4-碘苯硼酸。B液為5mM過氧化脲。

所述采用生物素一鏈親合素系統包被抗體，包括以下包被步驟： A、制備鏈霉親和素微孔板：0.05mol/L,pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋鏈霉親和素至15mg/mL，按100uL/孔加入微孔板中，4℃過夜包被。次日取出用0.01mol/L，pH7.4，含0.05％吐溫20PBS洗板3次。然后用牛血清白蛋白封閉液室溫封閉2小時。