[發(fā)明專利]用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒

在審

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• 申請日: 2017-08-22
• 公開（公告）號: CN107703303A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發(fā)明（設計）人: 余躍飛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州恒泰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531;G01N21/76
• 代理公司: 北京萬貝專利代理事務所(特殊普通合伙)11520
• 代理人: 陳領

1.用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，腫瘤標記物組分為：半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺酰基Β－羥化酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括腫瘤標記物標準品、腫瘤標記物單克隆捕獲抗體包被的微孔板、辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記的腫瘤標記物單克隆檢測抗體、化學發(fā)光底物液和濃縮洗滌液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述辣根過氧化物酶化學發(fā)光底物液包含A液和B液，其中A液/B液使用時需要1:1混合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，堿性磷酸酶化學發(fā)光底物液為金剛烷及其增強劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述腫瘤標記物分別制得的單克隆抗體作為捕獲抗體；

所述捕獲抗體的制備方法包括的步驟如下：

(1)抗原的制備：把半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺?；ⅲu化酶基因克隆到原核或真核表達載體，實現(xiàn)蛋白的表達純化后得到抗原；是為腫瘤標記物校準品；

(2)捕獲抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的單克隆抗體為捕獲抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述腫瘤標記物分別制得的制得的HRP標記后的多克隆抗體作為檢測抗體，

所述檢測抗體的制備方法包括的步驟如下：

(1)抗原的制備：把半乳糖凝集素、糖鏈抗原15-3和人類天冬胺?；ⅲu化酶基因克隆到原核或真核表達載體，實現(xiàn)蛋白的表達純化后得到抗原；是為腫瘤標記物校準品；

(2)檢測抗體的制備：將上述抗原免疫哺乳動物，得到相應的單克隆抗體，再經(jīng)辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記為檢測抗體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述辣根過氧化物酶化學發(fā)光底物液包含A液和B液，其中，化學發(fā)光底物液A液，包括13mM魯米諾、0.6mM 4-羥基聯(lián)苯、0.1mM 4-碘苯硼酸。B液為5mM過氧化脲。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于乳腺癌早中期快速診斷化學發(fā)光試劑盒的制備方法，其特征于，生物素一鏈親合素系統(tǒng)包被抗體，包括以下包被步驟：

A、制備鏈霉親和素微孔板：0.05mol/L,pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋鏈霉親和素至15mg/mL，按100uL/孔加入微孔板中，4℃過夜包被；次日取出用0.01mol/L，pH7.4，含0.05％吐溫20PBS洗板3次；然后用牛血清白蛋白封閉液室溫封閉2小時；

B、制備生物素化單克隆抗體：0.01M PBS將純化單克隆抗體稀釋至1mg/mL，然后用1.5M，pH 9.6CBS將抗體調(diào)至偏堿性；稱取0.5mg BNHS以0.5mL二甲基亞砜溶解，在1mL待標記抗體種加入BNHS液10μL，室溫避光，輕輕攪拌反應4h。標記產(chǎn)物在0.02M PBS中4℃透析過夜，收集標記抗體檢測備用；

C、包被生物素化單克隆抗體：將生物素化單克隆抗體稀釋至適當濃度，按100uL/孔加入鏈霉親和素微孔板中，37℃孵育2小時；

D、封閉：用0.01mol/L，pH7.4，含0.05％吐溫20PBS洗板3次，再用蔗糖封閉液37℃孵育30分鐘，吸水紙上拍干備用。