[發明專利]一種人細胞色素CYP2C19和PAR1基因多態性位點檢測試劑盒及用途

有效

• 申請號: 201710711160.0
• 申請日: 2017-08-18
• 公開（公告）號: CN109423513B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 王伊龍;王擁軍;趙性泉;林金嬉;李昊;林毅;潘岳松;劉麗萍
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京天壇醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 劉妍珺;崔佳佳

本發明提供了一種腦卒中用藥與遺傳相關性的檢測方法，所述檢測方法采用依據細胞色素P450CYP2C19*2：rs4244285；CYP2C19*3：rs4986893；CYP2C19*17：rs12248560和PAR?1:rs168753,共2個基因的的4個多態性位點的核苷酸序列合成引物及探針，進行實時熒光定量等位基因探針檢測，判斷待測目標是否屬于用藥易感人群。使用該方法，可以進行臨床用藥方案的指導及調整，為臨床個性化治療提供依據，預防藥物的不良反應。本方法可同時對2個基因的4個多態性位點同時檢測，具有簡便、準確、快速、高通量等優點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體地涉及一種人細胞色素P450CYP2C19和PAR1基因多態性位點檢測試劑盒及用途。

背景技術

缺血性心臟病和缺血性腦卒中是世界衛生組織(WHO)公布的全球死因的首要兩位，動脈粥樣硬化、斑塊破裂、血栓形成是心腦血管事件發生的直接原因，而血栓性疾病已成為人類健康的第一殺手，抗血小板治療是預防血栓性疾病的主要手段。

斑塊破裂和血栓形成是導致急性心血管事件的基本病理改變,抗栓尤其是抗血小板治療是急性冠脈綜合征最重要的干預措施。血小板無細胞核、是產生于骨髓巨核細胞胞漿的碎片。其在循環中的最大生存周期約10d。在正常情況下,血小板在血液循環中處于非激活狀態,而當血管內皮損傷或是動脈粥樣硬化斑塊破裂、內皮下的基質暴露、出現活化因子時,血小板即可被激活并在生理止血過程中起重要作用。

抗血小板藥物就是針對血小板激活的各個環節和相關靶點研發而成的,在機制上可作用于血小板激活、黏附、聚集的各個階段。

目前主要使用的藥物有：

環氧化酶(COX)抑制劑：阿司匹林可促進COX-1活性部位第529位絲氨酸乙酰化,不可逆抑制COX-1的活性。COX-1在前列腺素類生物合成的初始步驟中起著關鍵作用,它可催化花生四烯酸轉化為前列腺素H2(PGH2),而PGH2是TXA2的直接前體。阿司匹林抑制COX-1的結果是導致TXA2生成減少,而TXA2是強烈的血小板致聚物,TXA2生成減少終影響到血小板的聚集和釋放反應。

ADP受體抑制劑：氯吡格雷。該藥物口服后在小腸吸收,受到ABCB1基因編碼的質子泵P-糖蛋白調控,吸收后85％－95％被羧化酶水解為非活性的羧酸類代謝產物SR26334,僅10％－15％經肝臟細胞色素P450(CYP450)酶系代謝為活性產物。氯吡格雷活性代謝產物R-130964在經過肝臟循環時通過共價鍵不可逆地和血小板表面的ADP受體(P2Y12)結合,阻斷ADP對腺苷酸環化酶的抑制作用,促進cAMP依賴的VASP磷酸化,抑制纖維蛋白原與血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa受體結合,進而抑制血小板的聚集。此外,氯吡格雷還能阻斷繼發的ADP介導的糖蛋白GPⅡb/Ⅲa復合物的活化后引起的血小板活化擴增,從而抑制其他激動劑誘導的血小板聚集。

由于氯吡格雷必須經生物轉化為活性產物才能抑制血小板的聚集。該生物轉化過程需CYP2C19基因編碼的細胞色素P450在肝內代謝完成，活性產物能選擇性地、不可逆地阻斷二磷酸腺苷依賴的血小板聚集。

不同個體對于氯吡格雷具有不同的反應性，約有40％的亞裔病人在治療后仍顯示出殘留的血小板聚集，即所謂的“氯吡格雷抵抗”。其主要原因是CYP2C19*2，CYP2C19*3CYP2C19基因突變致使氯吡格雷的活性代謝產物減少導致的。最新臨床研究結果證實CYP2C19基因突變所導致的弱代謝個體，其栓塞重新形成的風險增加，心腦血管事件的發生風險增加，病死率升高。對于CYP2C19基因突變的個體，需要增加氯吡格雷的劑量(負荷劑量為300mg或600mg)，以達到阻斷血小板聚集的效果。

蛋白酶激活受體-1(PAR-1)是細胞表面的一種G蛋白偶聯受體，為凝血酶受體。凝血酶是最強的血小板活化劑,通過PAR1介導細胞反應。人類血小板表達PAR1受體,PAR1能與G12/13和Gq家族偶聯,并通過分泌ADP而間接激活Gi信號傳遞途徑，引起血小板活化的一系列改變，誘發凝血反應。在血栓形成與止血過程中發揮關鍵作用。