[發明專利]一種反式葉酸的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710701166.X
• 申請日: 2017-08-16
• 公開（公告）號: CN107365311B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 龐正查;陳敏;張仲景;劉露;許文韜;陳優富;王程鵬;陳蒙
• 申請（專利權）人: 浙江圣達生物藥業股份有限公司
• 主分類號: C07D475/04
• 分類號: C07D475/04
• 代理公司: 藍天知識產權代理(浙江)有限公司 33229
• 代理人: 苑新民

本發明涉及一種反式葉酸的制備方法及其應用，以對氨基苯甲酰谷氨酸、三氨基嘧啶硫酸鹽、三氯丙酮為原料，經化學合成的方法，顯著提高反式葉酸粗品的含量，再經制備色譜法分離，得到純度大于95％的反式葉酸。本發明的研究有利于進一步研究反式葉酸的產生機理及控制方法，能有效提高葉酸質量控制水平。

技術領域

本發明屬于有機合成領域，具體涉及一種反式葉酸的制備方法及其在葉酸質量控制中的應用。

背景技術

反式葉酸(isofolic acid)：

英文名：N-4-[(2-amido-4-oxo-1,4-dihydro-7-terene)methylamino]benzoyl-L-glutamic acid。

中文名：N-(4-((2-氨基-4-羥基-7-蝶啶基)甲基)氨基)苯甲酰-L-谷氨酸。

反式葉酸，即為EP藥典中葉酸雜質C。

葉酸(folic acid)也叫維生素B9，是一種水溶性維生素，是米切爾(H.K.Mitchell，1941)從菠菜葉中提取純化的，故而命名為葉酸。有促進骨髓中幼細胞成熟的作用，人類如缺乏葉酸可引起巨紅細胞性貧血以及白細胞減少癥，對孕婦尤其重要。

葉酸的攝入不足可引起多種相應的缺乏癥，如新生兒畸形、巨紅細胞貧血、心血管疾病、老年癡呆癥、寄生蟲病、壞血癥和類風濕性關節炎等。葉酸和葉酸的相關制品已經廣泛應用于食品、藥品、飼料、科研和化工業。

葉酸成品在進入歐盟市場的時候，應符合歐洲藥典EP的質量要求，即葉酸成品中雜質反式葉酸的含量≤0.5％。在葉酸質量研究中，需得到純度大于95％的反式葉酸對照品，用于葉酸成品中雜質定性及定量研究。目前反式葉酸的制備方法尚未見報道，而反式葉酸的標準品也無法購到。

現有技術中對葉酸雜質的研究僅限于采用控制蝶酸含量等純化的方法，如CN102432610B以及CN104098569A等中國專利文獻的記載。但是這些方法都僅僅是從怎么去除蝶酸雜質的角度，并沒有深入研究葉酸成品中其它雜質如反式葉酸的產生機理及控制方法。

發明內容

針對現有技術中存在的不足，本發明提供一種反式葉酸的制備方法及其應用，以N-(4-對氨基苯甲酰)-L-谷氨酸(本發明中也稱為對氨基苯甲酰谷氨酸)、2,4,5-三氨基-6-羥基嘧啶硫酸鹽(本發明中也稱為三氨基嘧啶硫酸鹽)、1,1,3-三氯丙酮(本發明中也稱為三氯丙酮)為原料，經化學合成的方法，顯著提升雜質的含量，再經制備色譜法分離，得到純度大于95％的反式葉酸。本發明的研究有利于進一步研究反式葉酸的產生機理及控制方法，有效提高葉酸質量控制水平。

反式葉酸反應方程式如下：

在本發明的優選的實施方式中，所述的制備方法包括以下步驟：

(1)反式葉酸粗品的合成

將對氨基苯甲酰谷氨酸、三氨基嘧啶硫酸鹽、三氯丙酮溶于水中，其中基于質量比計，對氨基苯甲酰谷氨酸：三氨基嘧啶硫酸鹽：三氯丙酮：水＝1：1～1.5：1.5～3：100～150，控制反應pH為2～7，反應溫度30～80℃，保溫2～10小時，過濾，濾餅用氨水溶解，過濾，濾液調節pH為1～3，過濾，得到粗品，純度5～15％；

(2)反式葉酸的提純

粗品用氨水溶解，過濾，濾液進半制備色譜分離，每次10ml，收集流出液，合并后減壓濃縮，加純化水稀釋1～5倍，泵入半制備色譜，用質量分數為5～20％甲醇洗出，收集流出液，減壓濃縮，濃縮液調pH至1～5，離心沉降，去除上層液，沉淀物經干燥，得到反式葉酸，其純度95～97％。