[發明專利]一種合相色譜?串聯質譜法測定無煙氣煙草制品中降煙堿對映異構體含量的方法

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• 申請號: 201710697590.1
• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107228914A
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發明（設計）人: 陳歡;韓書磊;付亞寧;劉彤;侯宏衛;胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

1.一種合相色譜-串聯質譜法測定無煙氣煙草制品中降煙堿對映異構體含量的方法，其特征在于：將無煙氣煙草制品樣品干燥、粉碎和過篩，樣品經過氫氧化鈉溶液浸潤后，采用二氯甲烷萃取，萃取液經基質分散固相萃取凈化后，使用手性柱-合相色譜-串聯質譜分析，采用峰面積歸一化法定量檢測無煙氣煙草制品中S-降煙堿和R-降煙堿的比例，具體步驟如下：

（1）標準溶液的配制：稱取100.0 mg的S-降煙堿標準品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為2.0 mg/mL的S-降煙堿標準儲備液；稱取100.0 mg的R-降煙堿標準品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度為2.0 mg/mL的R-降煙堿標準儲備液；利用S-降煙堿標準儲備液和R-降煙堿標準儲備液稀釋配制S-降煙堿和R-降煙堿濃度分別為100 μg/mL和100 μg/mL的混合標準溶液；

（2）無煙氣煙草制品樣品的混勻：將無煙氣煙草制品樣品置于40 ^oC烘箱中，1小時后將無煙氣煙草制品取出，粉碎后過0.45毫米孔徑標準篩；

（3）無煙氣煙草制品樣品的萃取：稱取0.3 g已粉碎的樣品于15 mL具塞離心管中，加入2.0 mL 5% 的氫氧化鈉溶液，渦旋1 min混勻后靜置10 min浸潤樣品；取10 mL二氯甲烷到上述具塞離心管中，并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min；

（4）萃取液的凈化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL內含有基質分散固相萃取材料的凈化離心管中，于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min，以10000 rpm離心1 min，取上清液過0.45 μm有機相濾膜后進液相分析；

（5）串聯手性柱-合相色譜串聯質譜法條件：分析柱1為Trefoil CEL1柱，柱長 150 mm ，內徑3.0 mm ，固定相粒徑2.5 μm，分析柱2為Chiralcel OD-H液相色譜柱，柱長 250 mm ，內徑4.6 mm ，固定相粒徑5 μm；流動相A為：CO2，流動相B：含0.05%異丙胺的甲醇；流速為1.0 mL/min；梯度洗脫條件為：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；12.0 min，92% A； 30.0 min，90% A；柱溫40 ℃；進樣室溫度：10 ℃；進樣體積2 μL；背壓：1600 psi；ISM補償流路流動相為含0.1%甲酸的甲醇，流速為0.3 mL/min；分析時間總計30 min；質譜條件：離子源：電噴霧源，掃描方式為正離子掃描，離子源溫度為300 ℃，電噴霧電壓為5000 V，霧化氣壓力為40 psi；檢測方式：多反應監測（MRM）；通過對峰面積進行歸一化定量S-降煙堿和R-降煙堿占總降煙堿的比例。

2.根據權利要求1所述的合相色譜-串聯質譜法測定無煙氣煙草制品中降煙堿對映異構體含量的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的基質分散固相萃取材料含：150 mg無水硫酸鎂，50 mg PSA吸附劑，25 mg GCB吸附劑。