[發明專利]一種基于DNA條形碼技術的中藥材蒼術種苗鑒定方法

有效

• 申請號: 201710696645.7
• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107254544B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 劉金欣;石林春;唐先明;魏妙潔;趙春穎;王燕;苗光新;謝利德;劉景波;蘇占輝
• 申請（專利權）人: 承德醫學院;中國醫學科學院藥用植物研究所;哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 上海宛林專利代理事務所(普通合伙) 31361
• 代理人: 張明

本發明公開了一種基于DNA條形碼技術的中藥材蒼術種苗鑒定方法，該方法提供了中藥材蒼術及其易混偽品的標準ITS2條形碼數據庫，通過將待鑒定樣品的ITS2序列與所述標準ITS2條形碼數據庫中的序列進行比對，以鑒別中藥材蒼術種苗真偽。本發明的方法能夠快速有效的鑒別出蒼術種苗及其易混偽品種苗，從源頭保證中藥材蒼術生產的安全性。

技術領域

本發明涉及中藥材鑒定方法，具體涉及一種基于DNA條形碼技術的中藥材蒼術種苗鑒定方法。

背景技術

據2015版中國藥典記載，蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北蒼術Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根，英文版植物志(《Flora ofChina》)將茅蒼術和北蒼術修訂為蒼術Atractylodes lancea(Thunberg)Candolle。蒼術辛、苦，溫。歸脾、胃、肝經。燥濕健脾，祛風散寒，明目。用于濕阻中焦，脘腹脹滿，泄瀉，水腫，腳氣痿躄，風濕痹痛，風寒感冒，夜盲，眼目昏澀。蒼術素等揮發油成分被認為是蒼術的主要藥理活性成分，現代藥理研究表明蒼術具有抑制胃酸分泌、抗心律失常、抑菌抗炎、降血糖、抗缺氧等作用。蒼術是藿香正氣水、如意金黃散、國公酒等知名中成藥的重要成分，資源需求量大，野生藥材已瀕危和枯竭，栽培種植規模逐漸擴大，湖北、江蘇、內蒙古、河北等地為其藥材主產地。蒼術栽培有種苗(分株繁殖、根莖繁殖)和種子繁殖兩種方式，以種苗繁殖為主。近年來，隨著蒼術價格走高，蒼術的栽培面積不斷擴大，正品蒼術種苗貨源有限，蒼術種苗摻假時有發生。

我國尚缺乏與農作物種子相類似的良種生產管理規范。2013年，國家食品藥品監督管理總局等部門“關于進一步加強中藥材管理的通知”中指出“統一建立種子種苗繁育基地”。但當前中藥材種子種苗仍以自產自銷為主，種子種苗質量參差不齊，特別是野生資源緊缺，市場價值高的中藥材品種，已成為種子種苗摻偽的重災區。近年來隨著蒼術價格持續走高，野生資源逐漸枯竭，但蒼術“野生變家種”技術尚未完全成熟，北蒼術自身種苗產量有限，野外采集的種苗不足以滿足種植需求，相當數量種苗購自蒼術栽培較久的東北地區，而東北蒼術栽培物種以地方習慣用品關蒼術和朝鮮蒼術為主，導致了當前蒼術種苗混亂的情況。

DNA條形碼技術利用基因組中一段通用的標準短序列進行物種鑒定，不依賴鑒定對象的形態特征，不受鑒定對象生長發育階段的影響，是近年來新興的種子種苗鑒定方法，已應用于多種中藥材種子種苗的鑒定研究。當前，多數中藥材野生資源嚴重不足，中藥材人工栽培種植是保障中藥安全的重要途徑。中藥材種子種苗是中藥材栽培種植的源頭，如何保證中藥材種子種苗基原物種正確是中藥材生產的基本前提，中藥材種子種苗鑒定錯誤必然會埋下中藥材混偽品充斥市場的隱患。傳統的中藥材種子種苗鑒定方法以種子種苗形態特征為依據，借助放大鏡、體式顯微鏡等工具識別種子種苗的微觀特征，對鑒定者的專業知識要求極高，且易受中藥材種子種苗成熟度、保存狀態、群體差異影響，主觀性較強。DNA條形碼技術從中藥材種子種苗的基因層面進行研究，通過比較DNA序列上的差異進行物種區分鑒定，不受樣品形態特征限制，鑒定結果更加準確可靠。已完成的羌活、澤瀉、重樓等中藥材種子、種苗DNA條形碼鑒定研究表明：DNA條形碼技術對發現中藥材種子種苗市場混偽品具有獨特優勢，為從源頭保證中藥材種子種苗的真實性，避免經濟損失，保障中藥材生產安全具有重要意義。

因此，本領域技術人員致力于開發一種基于DNA條形碼技術的中藥材蒼術種苗鑒定方法及用于中藥材蒼術種苗鑒定的標準ITS2條形碼數據庫。

發明內容

傳統上，中藥材蒼術(Atractylodis Rhizoma)種苗依賴種苗的外部形態和內部解剖特征進行鑒定，由于種苗為植物生長的起始階段，尚缺乏花、果等形態分類學鑒定所需的典型特征，難以準確鑒定到物種。近年來由于鑒定失誤引起的中藥材蒼術引種錯誤不僅帶來了巨大的經濟損失，也造成了潛在的臨床用藥安全風險。為了克服上述缺陷，本發明提供了一種基于DNA條形碼技術的中藥材蒼術種苗鑒定方法，擺脫了傳統鑒定方法依賴形態特征的障礙，鑒定客觀、準確。