[發明專利]一組干酪乳桿菌基因敲除載體及其應用

有效

• 申請號: 201710696363.7
• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107502619B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 孔健;郭婷婷;辛永平
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/245
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

1.一種用于構建干酪乳桿菌基因敲除突變株的工具盒，包括：

1)一個介導外源雙鏈DNA敲除盒up-lox66-cat-lox71-down與染色體上同源序列之間進行同源重組的專用載體，命名為pMSP456，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；和

2)一個介導lox66和lox71位點之間的重組反應以便切除抗性基因的專用載體，命名為pMSPcre，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.權利要求1所述的工具盒在構建干酪乳桿菌基因敲除突變株中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，首先使載體pMSP456上的外源雙鏈DNA敲除盒up-lox66-cat-lox71-down與染色體上同源序列之間發生重組反應，將目的基因替換為lox66-cat-lox71；再利用載體pMSPcre表達的重組酶Cre介導lox66和lox71位點發生重組反應將氯霉素抗性基因cat切除，將目的基因替換為一個lox72位點，實現目的基因的敲除，即可獲得干酪乳桿菌敲除突變株。