[發明專利]一種孜然種子多肽部位的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710684032.1
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107365349B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 阿布力米提·伊力;雅森·米吉提;阿吉艾克拜爾·艾薩;帕爾哈提·柔孜;艾合米丁·外力
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆理化技術研究所
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;A23L33/18;A23L33/105;A61K38/01;A61P31/04;A61P31/10
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

1.一種孜然種子多肽部位的制備方法，其特征在于該方法以孜然種子粉為原料，具體操作按下列步驟進行：

a、取孜然種子粉，按料液重量比為1∶5加入石油醚，在室溫下攪拌2－3小時，反復提取3-4次至未有油脂提取出為止，抽濾，合并沉淀，自然干燥至未有石油醚溶劑殘留為止，得到脫脂的孜然種子粉；

b、將步驟a中充分脫脂的孜然種子粉按料液重量比為1∶5加入濃度為50%乙醇，在室溫下攪拌提取2-3小時，反復提取3-4次，減壓抽濾，合并提取液，分離雜物，得到多肽粗提取溶液，備用；

c、將步驟b中得到的多肽粗提取溶液，利用蒸餾水稀釋至濃度為10%-20%的乙醇溶液，將稀釋的提取溶液上已用10%-20%的乙醇平衡好的反相碳18色譜柱，流速為3ml/min，在紫外檢測儀280納米下進行洗脫，用濃度為30%、50%或70%乙醇洗脫，得到粗多肽30%、50%或70%部位：

d、將步驟c得到的粗多肽各部位利用旋轉蒸發儀濃縮至無乙醇溶液殘留后分別冷凍干燥，壓力10Pa，溫度-82℃，得到孜然種子30%、50%或70%乙醇洗脫部位；

e、將步驟d得到的孜然種子30%、50%或70%乙醇洗脫部位溶解于pH 8磷酸緩沖溶液0.05mmol/L， 10000轉/ min離心10分鐘，取上清液，上已用濃度為0.05 mmol/L pH 8磷酸緩沖溶液平衡的瓊脂糖凝膠陰離子交換樹脂色譜柱，流速為3ml/min，在紫外檢測儀280納米下進行洗脫回收陰離子交換樹脂瓊脂糖凝膠未結合部位；

f、將步驟e 得到的陰離子交換樹脂瓊脂糖凝膠未結合部位回收液的pH調為6，上已用濃度為0.05 mmol/L pH 6磷酸緩沖溶液平衡的陽離子交換樹脂色譜柱，流速為3 ml/min，在紫外檢測儀280納米下進行洗脫后回收陽離子交換樹脂未結合部位，將得到的陽離子交換樹脂未結合部位洗脫回收液采用截留分子量為1kDa的再生纖維素透析袋透析48小時后冷凍干燥，取得孜然種子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脫部位的中性多肽；

g、將步驟e洗脫后的瓊脂糖凝膠陰離子交換樹脂的柱子以濃度為0.5mol/L pH8的磷酸緩沖溶液加入氯化鈉洗脫液洗脫回收陰離子交換樹脂結合部位，采用截留分子量為1kDa的再生纖維素透析袋透析48小時后冷凍干燥，取得孜然種子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脫部位的酸性多肽；

h、將步驟f 得到的陽離子交換樹脂色譜柱結合部位以濃度為0.5 mol/L pH6的磷酸緩沖溶液加入氯化鈉洗脫液洗脫回收陽離子交換樹脂結合部位，采用截留分子量為1KDa的再生纖維素透析袋透析48小時后冷凍干燥，取得孜然種子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脫部位的堿性多肽；

i、將得到的孜然種子粗多肽30%、50%或70%乙醇洗脫部位分離后的酸性、中性或堿性多肽溶解于純凈水中，上分別已用純凈水平衡好的濃度為100mg/ml葡聚糖凝膠-25色譜柱脫鹽，溫度42℃濃縮回收，冷凍干燥、包裝得到孜然種子多肽部位。

2.一種如權利要求1所述方法獲得的孜然種子多肽部位在制備抗白色念珠菌、大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌生物活性的藥物中的用途。

3.一種如權利要求1所述方法獲得的孜然種子多肽部位在制備食品添加劑中的用途。