[發明專利]使用定量PCR和數字PCR進行核酸檢測的新穎制劑、方法和系統

在審

• 申請號: 201710681811.6
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107287337A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 陳海肅;格雷戈里·金茨;李耀輝;李晨
• 申請（專利權）人: 卡尤迪生物科技宜興有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/34
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種用于鑒定來自從受試者獲得的生物樣品的靶核酸分子的存在與否，或相對量的方法，其包括：

(a)生成乳液，所述乳液包含氟化油、電子液體和基于月桂醚的表面活性劑，其中所述乳液包含多個小液滴，所述小液滴包含(i)來自所述受試者的所述生物樣品的多個核酸分子，和(ii)進行脫氧核糖核酸(DNA)擴增和任選的逆轉錄擴增所需的試劑；

(b)對所述多個小液滴中的所述多個核酸分子在足以產生所述多個核酸分子的擴增產物的條件下進行所述DNA擴增；以及

(c)檢測來自所述多個小液滴中的一個或多個小液滴的信號，其中所述信號指示所述多個核酸分子中的所述靶核酸分子的存在與否或相對量。

2.權利要求1的方法，其中所述DNA擴增是聚合酶鏈反應(PCR)。

3.權利要求1的方法，其中所述生物樣品從所述受試者直接獲得，未經預培養、非選擇性富集、選擇性富集、鋪板于區分培養基、和/或預期性生物醫學鑒定。

4.權利要求1的方法，其中所述生物樣品來自所述受試者的組織或流體。

5.權利要求1的方法，其中(a)中的所述試劑包含生成所述信號的報告劑。

6.權利要求5的方法，其中所述信號的強度與所述多個核酸分子的所述擴增產物的量成比例。

7.權利要求5的方法，其中所述報告劑是染料。

8.權利要求7的方法，其中所述染料是熒光染料。

9.權利要求1的方法，其中所述小液滴包含包封于油相的水相，其中所述水相包含所述多個核酸分子和所述試劑。

10.權利要求1的方法，其中所述小液滴在高于95℃的溫度下是穩定的，不發生變形或合并。

11.權利要求1的方法，其中包含于所述多個小液滴的所述多個核酸分子未經提取和/或純化。

12.權利要求1的方法，其中所述乳液通過將水性的第一流體和非水性的第二流體混合來生成。

13.權利要求12的方法，其中所述乳液通過將水性的第一流體和非水性的第二流體混合以產生混合物，接著對所述混合物進行渦旋來生成。

14.權利要求1的方法，其中所述電子液體是電絕緣液體。

15.權利要求1的方法，其中所述電子液體是基于氟代烴的液體。

16.權利要求1的方法，其中所述電子液體包含全氟三戊胺。

17.權利要求1的方法，其中所述基于月桂醚的表面活性劑是乙醇酸聚氧乙基月桂醚。

18.權利要求17的方法，其中所述乳液還包含另一種表面活性劑。

19.權利要求18的方法，其中所述另一種表面活性劑是聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯。

20.權利要求1的方法，其中(b)包括與所述DNA擴增平行進行逆轉錄擴增。

21.權利要求1的方法，其中(b)包括(i)對所述多個核酸分子進行逆轉錄擴增以產生互補DNA(cDNA)分子，和(ii)對所述cDNA分子的至少一個子集進行與所述逆轉錄擴增平行的DNA擴增以產生所述擴增產物。

22.權利要求1的方法，其還包括將關于所述擴增產物的量的信息輸出至接收者。

23.權利要求22的方法，其中所述信息作為報告輸出。

24.一種用于鑒定來自從受試者獲得的生物樣品的靶核酸分子的存在與否，或相對量的系統，其包括：

小液滴生成器，其生成乳液，所述乳液包含氟化油、電子液體和基于月桂醚的表面活性劑，其中所述乳液包含多個小液滴，所述小液滴包含(i)來自所述受試者的所述生物樣品的多個核酸分子，和(ii)進行脫氧核糖核酸(DNA)擴增和任選的逆轉錄擴增所需的試劑；

控制器，其與所述小液滴生成器可操作地連接，其中所述控制器被編程為(i)對所述多個小液滴中的所述多個核酸分子在足以產生所述多個核酸分子的擴增產物的條件下進行所述DNA擴增；以及(ii)檢測來自所述多個小液滴中的一個或多個小液滴的信號，其中所述信號指示所述多個核酸分子中的所述靶核酸分子的存在與否或相對量。