[發明專利]用于流感疫苗生產的MDCK細胞株

有效

• 申請號: 201710676196.X
• 申請日: 2017-08-09
• 公開（公告）號: CN107603942B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 楊曉明;黃曉媛;張家友;劉洋;趙巍;施金榮;王英;韓錫鑫
• 申請（專利權）人: 武漢生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 唐寧

本發明涉及一種用于流感疫苗生產的MDCK細胞株。所述的細胞株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:C201773，本發明還涉及所述的MDCK?G1細胞株在制備流感病毒疫苗中的應用，所述的流感病毒優選為H5N1病毒，所述的疫苗包括減毒活疫苗或滅活疫苗，優選為滅活疫苗。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體而言，涉及一種用于流感疫苗生產的MDCK細胞株。

背景技術

目前我國上市的流感疫苗均為以傳統雞胚為基質生產而來，由于雞胚生產的流感疫苗， 存在著生產周期長、傳代中毒株易變異、過程控制中存在較大安全隱患、禽流感大規模爆發 時不能及時滿足疫苗供應等現狀。基于這些不足，WHO早在1995年就建議研發以哺乳動物 細胞作為基質代替傳統的雞胚來生產流感疫苗[1]。目前MDCK細胞(犬腎細胞)[2]、PER.C6 細胞(人胚胎視網膜母細胞)[3]和Vero細胞(非洲綠猴腎細胞)[4]等均在用于流感疫苗的 生產研究。由于流感在MDCK細胞中傳代變異小、病毒滴度高、MDCK細胞可建庫易于生 物反應器系統放大培養等優勢，因此MDCK成為細胞基質流感疫苗的首選基質。VRBPAC(Vaccines and Related Biological Products Advisory Committee)更進一步在2005年和2008 年專題討論以MDCK細胞為細胞基質生產滅活流感疫苗和減毒流感疫苗[5]。

MDCK細胞(Madin-Darby canine kidney cells)是正常犬腎來源的傳代細胞[6]。1958年 Madin和Darby從健康成年母犬(Cocker Spaniel)的腎臟組織中分離培養建立，后經轉化而 形成傳代細胞系。目前用于研究的MDCK細胞多數來源于ATCC,但是原始MDCK細胞株在 培養過程中發現其形態、增殖速率以及核型上出現很大差異。對此，很多實驗室通過克隆篩 選亞細胞株來滿足不同的目的，其中諾華和MeddImmune就通過克隆篩選得到了擁有自主知 識產權且適宜于生產流感疫苗的細胞株，目前二者的細胞基質流感疫苗已經在歐美上市[7,8]。 目前國內還沒有MDCK細胞基質流感疫苗申報。

接種流感疫苗是預防和控制流感大流行的有效方法。目前上市的流感疫苗有全病毒滅活 疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗及減毒活疫苗四種類型，這四種疫苗中絕大多數疫苗是以雞胚 為培養基質，盡管傳統的雞胚基質疫苗在流感控制方面起到重要作用，但其潛在的缺點也一 直成為限制流感疫苗產能擴大、品質提高和應急生產的瓶頸。鑒于此，1995年WHO建議各 流感疫苗生產企業使用哺乳動物細胞培養流感病毒來代替雞胚培養以快速制備流感疫苗，使 其抗原性更接近自然流行株，減少宿主蛋白成分，降低接種對象的不良反應。目前在國外已 經有以MDCK細胞為基質的流感疫苗上市。

參考文獻：

1.Cell culture as a substrate for the production of influenzavaccines:memorandum from a WHO meeting.Bull World Health Organ 1995,74(4):431-435.

2.Sun B,Yu X,Kong W,Sun S,Yang P,Zhu C,Zhang H,Wu Y,Chen Y,Shi Y etal: Production of influenza H1N1vaccine from MDCK cells using a noveldisposable packed-bed bioreactor.Applied microbiology and biotechnology 2013,97(3):1063-1070.