[發明專利]一種β-甘露糖苷酶及其應用

有效

• 申請號: 201710665651.6
• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN109385411B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 王耀輝;謝敏;謝建華;何志梅;徐莉敏;王錚
• 申請（專利權）人: 東莞泛亞太生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12P19/02;C12R1/84
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 張艷美;郝傳鑫

本發明公開了一種β?甘露糖苷酶及其應用。本發明的β?甘露糖苷酶的多肽的序列為：(1a)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或者(2a)與SEQ ID NO：1具有至少75％序列同一性且具有與SEQ ID NO：1相同功能的β?甘露糖苷酶的氨基酸序列。本發明還公開一種β?甘露糖苷酶的表達載體及宿主細胞。本發明公開的β?甘露糖苷酶在pH 3.5?8以及溫度30?65℃具有較好的甘露糖苷酶酶活穩定性。將本發明的β?甘露糖苷酶用于生產甘露糖時，甘露糖的產量能夠達到7.1mg/mL，是不添加本發明β?甘露糖苷酶的約6倍，具有潛在的工業應用價值。

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種β-甘露糖苷酶及其應用。

背景技術

β-甘露糖苷酶(EC3.2.1.25)屬于半纖維素酶系的一種外切酶，它能催化水解1，4-β-D糖苷酶，在非還原端切下甘露糖，在食品、制藥、石油和生物轉化等行業有廣泛的應用(Mccleary B V，Nurthen E，Taravel F R，et al.Characterisat ion ofoligosaccharides produced on hydrolysis of galactomannan with β-D-m annanase[J].Carbohydrate Research，1983，118(JUL)：91-109)尤其可以替代化學法生產甘露糖。甘露糖溶解性好，不易結晶，在食品和制藥行業中具有潛在的應用價值。β-甘露糖苷酶另一個應用是利用它的轉糖苷能力合成甘露寡糖，以替代化學方法生產功能性甘露寡糖(TaubkenN，ThiemJ.Enzymatic Synthesis of Alkyl and Hydroxyalkyl β-D-Mannopyranosides[J].Synthesis，1992，1992(6)：517-518.)，甘露寡糖不僅能增強動物的免疫能力，降低胃腸道疾病的發生率和動物的死亡率，而且還能提高動物的日增重和飼料轉化率(岳文斌，車向榮，減建軍，等.甘露寡糖對斷奶仔豬腸道主要菌群和免疫機能的影響[J].山西農業大學學報(自然科學版)，2002，22(2)：97-101)。因此，對β-甘露糖苷酶的開發具有重要的工業化應用前景。

國外己有少數微生物來源β-甘露糖苷酶基因克隆和表達的報道(ChauhanPS，GuptaN.Insight into microbial mannosidases：a review[J].Critical Reviews inBiotechnology，2016，8：1-12.)，但文獻中報道的大多數β-甘露糖苷酶的分子量較大，在90～130KDa，難于表達，限制了β-甘露糖苷酶的應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種β-甘露糖苷酶的多肽、其編碼基因、表達該β-甘露糖苷酶的多肽的菌株、宿主細胞及表達載體，并提供一種β-甘露糖苷酶的應用。

為實現上述目的，本發明所采取的技術方案為：一種β-甘露糖苷酶的多肽，所述β-甘露糖苷酶的多肽的序列為：

(1a)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或者

(2a)與SEQ ID NO：1具有至少75％序列同一性且與SEQ ID NO：1具有相同的β-甘露糖苷酶功能的氨基酸序列。

本發明提供了上述β-甘露糖苷酶的多肽的編碼基因，所述新型β-甘露糖苷酶多肽的編碼基因由以下序列組成：

(1b)SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；或者

(2b)與SEQ ID NO：2具有至少75％序列同一性且與SEQ ID NO：2具有相同的β-甘露糖苷酶功能的核苷酸序列。