[發明專利]一種質粒載體及其構建方法有效
| 申請號： | 201710656310.2 | 申請日： | 2017-08-03 |
| 公開（公告）號： | CN107287230B | 公開（公告）日： | 2020-10-13 |
| 發明（設計）人： | 安迎鋒;高和瑞;高嵩;張藝鋒;許淑敏;劉霞 | 申請（專利權）人： | 沈陽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/64 |
| 代理公司： | 北京市領專知識產權代理有限公司 11590 | 代理人： | 林輝輪 |
| 地址： | 110866 遼寧省沈陽市沈河*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 質粒 載體 及其 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種兼具定向TA克隆，無背景粘性末端克隆和表達功能的質粒載體，該質粒框架同時兼具多種基因克隆和表達的組成原件，其特征在于：包括具備含有兩個特定序列的AhdI酶切位點，也就是5’-GACCCT↓GGGTC-3’和5’-GACCTA↓TGGTC-3’，結合插入DNA片段的特定引物設計，以及DNA連接過程中同步AvrII/NcoI雙酶切，用于定向TA克隆；具備BsaI酶切位點，用于粘性末端克隆；多克隆位點之間具有ccdB毒性蛋白基因，作為負篩選標記，用于在無需膠回收的情況下，去除克隆過程中可能引入的假陽性；具備T7啟動子和T7終止子，用于高效表達外源蛋白，所述的質粒載體具有SEQ ID No:1中所示的堿基序列。
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