[發明專利]一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑、制備方法和凍干疫苗及制備方法

有效

• 申請號: 201710652400.4
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107281481B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 萬成燕;吳越;李宇;夏宏燕;周應輝;池波;邱梁凍;呂亮
• 申請（專利權）人: 華派生物工程集團有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61K47/42;A61K47/26;A61K47/20;A61K47/18;A61K47/32;A61P31/22
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李林合;李蕊

本發明提供了一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑，包括以下重量份的組分：明膠3～10份、海藻糖1～5份、蔗糖5～15份、牛血清白蛋白0.1～2份、胰蛋白胨1～8份、酶解酪蛋白2～10份、硫脲1～5份、L?谷氨酸鈉0.8～2份、精氨酸0.1～3份、聚乙烯吡咯烷酮(PVP?K30)0.5～5份和甘露醇0.1～2份。本發明還公開了該耐熱凍干保護劑的制備方法以及采用該保護劑制得的凍干疫苗。使用該耐熱凍干保護劑保護疫苗，其采用特定的凍干工藝，可有效降低病毒的凍干損失，可以提高病毒對溫度的耐受能力，疫苗在長期保持后依然能維持良好的物理性狀和效價，即性狀穩定，具有耐熱、保存時間長的特點。

技術領域

本發明屬于疫苗耐熱保護劑技術領域，具體涉及一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑、保護劑的制備方法以及凍干疫苗及凍干疫苗的制備方法。

背景技術

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的豬的急性傳染病。該病在豬呈暴發性流行，可引起妊娠母豬流產、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長停滯等，是危害全球養豬業的重大傳染病之一。而疫苗免疫接種是預防和控制偽狂犬病的根本措施。

病毒等生物活性物質及其相關制品的熱敏感性一直是活疫苗長期保存的瓶頸。我國幅員遼闊，經濟水平差異較大，運輸、使用過程中疫苗短期暴露高溫環境(甚至45℃以上)的現象依然存在，所以對活疫苗的耐熱性能提出了更高的要求。

活疫苗的冷凍干燥工藝對其保存期也有很大的影響。常規冷凍干燥工藝中，活疫苗首先被超低溫凍結(-40℃以下)，形成的冰結晶對病毒的囊膜或者細胞壁造成不同程度的傷害，進而影響干燥產品水合后的活性。因此，常規冷凍干燥工藝中，制品的耐熱性能還是有限的，室溫甚至更高溫度的穩定性是不高的。

在食品、藥品以及生物體的冷凍干燥和貯藏過程中，很多因素，例如化學成分、凍結速率、凍結和脫水應力、玻璃化轉變溫度、干燥固體中剩余水分、貯藏環境的溫度和濕度等都會影響其中活性組分的穩定性甚至會導致失活。為了防止生物制品活性組分的變性，需要添加合適冷凍干燥保護劑和添加劑，配制成混合液后，才能進行有效的冷凍干燥和貯藏。

另外，近年來隨著我國畜牧業的飛速發展，養殖密度加大，疫病種類增多且暴發頻繁，與之相適應的動物防疫模式也發生了根本性的變化。防疫質量成為制約這一變化的瓶頸之一，疫苗質量更是其中的關鍵問題。眾所周知，疫苗特別是活疫苗對于冷鏈運輸以及儲存溫度要求非常高，而這一環節控制不好將直接影響疫苗質量，因此，對于耐熱保護劑的開發顯得尤為重要。

在實際生產中，疫苗耐熱劑的開發難度大，而且保護效果不佳，因此，研制一種能適用于大規模生產且保護功能強的偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑顯得尤為重要。

發明內容

針對現有技術中存在的上述問題，本發明提供一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑、保護劑的制備方法以及凍干疫苗及凍干疫苗的制備方法，可有效解決現有的偽狂犬活疫苗耐熱保護劑保護效果不佳的問題。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑，包括以下重量份的組分：明膠3～10份、海藻糖1～5份、蔗糖5～15份、牛血清白蛋白0.1～2份、胰蛋白胨1～8份、酶解酪蛋白2～10份、硫脲1～5份、L-谷氨酸鈉0.8～2份、精氨酸0.1～3份、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)0.5～5份和甘露醇0.1～2份。

進一步地，一種偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑，包括以下重量份的組分：明膠5份、海藻糖1.5份、蔗糖9.6份、牛血清白蛋白0.2份、胰蛋白胨4份、酶解酪蛋白4份、硫脲1.6份、L-谷氨酸鈉1.2份、精氨酸0.2份、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K30)1份和甘露醇0.1份。

上述偽狂犬活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備A液