[發(fā)明專利]一種用于CIK細胞于-80℃直接凍存的凍存液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710636110.0
• 申請日: 2017-07-31
• 公開（公告）號: CN107156112B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 胡攀勇;張鐘祥;張世超
• 申請（專利權(quán)）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京華識知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11530
• 代理人: 喬浩剛

本發(fā)明公開了一種用于CIK細胞于?80℃直接凍存的凍存液，該凍存液以RPMI?1640培養(yǎng)液為基質(zhì)，在基質(zhì)中添加DMSO、FBS復配而成，基質(zhì)中還添加有效量的人β2?微球蛋白。使用本發(fā)明提供的細胞凍存液凍存CIK細胞時，可以直接于?80℃凍存，且不會導致CIK細胞殺傷力明顯降低，可以簡化CIK細胞低溫凍存工藝。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞凍存領(lǐng)域，具體涉及一種用于CIK細胞于-80℃直接凍存的凍存液。

背景技術(shù)

凍存CIK細胞時，一般降溫程序為：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，最后轉(zhuǎn)至-80℃低溫冰箱放置(或用液氮保存)，程序繁瑣。但是，若直接將CIK細胞轉(zhuǎn)至-80℃低溫冰箱保存，會顯著降低CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性【參考文獻：-80℃冰箱直接凍存對細胞因子誘導的殺傷細胞殺傷活性的影響，細胞與分子免疫學雜志，2012，28(10)】。

這主要與細胞凍存液有關(guān)，現(xiàn)有凍存液不適合用作CIK細胞于-80℃直接凍存的保護劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，簡化CIK細胞低溫凍存工藝，提供一種用于CIK細胞于-80℃直接凍存的凍存液。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案得以實現(xiàn)：

一種細胞凍存液，以RPMI-1640培養(yǎng)液為基質(zhì)，在基質(zhì)中添加DMSO、FBS復配而成，基質(zhì)中還添加有效量的人β2-微球蛋白。

優(yōu)選地，1L基質(zhì)添加1-2g人β2-微球蛋白。

優(yōu)選地，1L基質(zhì)添加80-120mLDMSO。

優(yōu)選地，1L基質(zhì)添加180-220mLFBS。

上述細胞凍存液在CIK細胞凍存方面的應用。

本發(fā)明優(yōu)點：

使用本發(fā)明提供的細胞凍存液凍存CIK細胞時，可以直接于-80℃凍存，且不會導致CIK細胞殺傷力明顯降低，可以簡化CIK細胞低溫凍存工藝。

附圖說明

圖1為不同CIK細胞對K562細胞的殺傷率(％)。

具體實施方式

為了更好地解釋本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實施例進一步介紹。實施例中未特別強調(diào)的實驗材料均為常規(guī)實驗材料，屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員易于獲得的范疇。

實施例1

一、實驗材料和方法

1、細胞凍存液的配制

在RPMI-1640培養(yǎng)液(美國Gibco公司)中添加二甲基亞砜(DMSO)、胎牛血清(FBS，美國Gibco公司)和人β2-微球蛋白(購于武漢戴安生物技術(shù)有限公司，貨號P0008)，其中：1LRPMI-1640培養(yǎng)液中分別添加1.5g人β2-微球蛋白、100mL DMSO、200mLFBS?；旌暇鶆蚝笥?℃低溫保存，使用前取出并輕輕搖勻。

另按照常規(guī)配方配制對比凍存液，對比凍存液的成分為含10％DMSO及20％FBS的RPMI-1640作為凍存劑。

2、CIK細胞的培養(yǎng)擴增