[發明專利]腺苷在制備雌激素類藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710634138.0
• 申請日: 2017-07-29
• 公開（公告）號: CN107349216A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 鄭曉珂;曾夢楠;李苗;張貝貝;吳廣操;司彥坡;馮衛生
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: A61K31/7076
• 分類號: A61K31/7076;A61P5/30
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙)41113
• 代理人: 蔡文雅

技術領域

本發明涉及醫藥領域，特別是一種腺苷在制備雌激素類藥物中的應用。

背景技術

植物雌激素存在于一些天然植物中，具有雌激素樣作用。植物雌激素可與體內雌激素受體和雌激素相關受體結合起到雙向調節雌激素受體作用，顯示出雌激素樣活性。在體內雌激素水平較低時有擬雌激素樣作用；當體內雌激素水平較高時，可通過競爭性與雌激素受體結合，抑制內源性雌激素的作用而產生抗雌激素活性。因此，植物雌激素被稱為天然的選擇性雌激素受體調節劑。天然的植物雌激素相比于合成的雌激素，其雌激素樣活性要低，但是所引起的乳腺癌、子宮內膜癌等副作用也更少，使用會更安全。因此對植物雌激素的研究逐漸成為熱點。

腺苷，指由腺嘌呤的N-9與D-核糖的C-1通過β糖苷鍵連接而成的化合物，其磷酸酯為腺苷酸。腺苷是一種遍布人體細胞的內源性核苷，可直接進入心肌經磷酸化生成腺苷酸，參與心肌能量代謝，同時還參與擴張冠脈血管，增加血流量。腺苷對心血管系統和肌體的許多其它系統及組織均有生理作用。腺苷能使房室結傳導減慢，阻斷房室結折返途徑，陣發性室上性心動過速(PSVT)(伴或不伴預激綜合征)患者恢復正常竇性心律，而腺苷的雌激素樣作用的研究未見報道。

發明內容

針對上述情況，為解決現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種腺苷在制備雌激素類藥物中的應用，即腺苷的新用途，可有效用于雌激素類藥物的制備。

本發明解決的技術方案是，達到雌激素樣作用的腺苷給藥量不低于50mg/kg/d。

本發明開辟了腺苷的新用途，有效用于雌激素類藥物的制備，解決由于體內雌性激素分泌不足而引起的相關疾病，是藥物上的創新。

具體實施方式

以下結合試驗資料對本發明的具體實施方式作進一步詳細說明。

本發明首次發現腺苷具有雌激素樣作用，有關試驗資料如下：

1實驗材料

1.1實驗藥物

腺苷(索萊寶A8240)。

1.2實驗動物與細胞株

清潔級昆明種小鼠，雌性，出生21天(剛斷乳)，體重9～12g，購自于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK(京)2016-0011。人乳腺癌細胞(MCF-7)購自中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞資源中心。

1.3儀器與試劑

戊酸雌二醇片(拜耳醫藥)；酶標儀(BIO-RAD 680)；ZRD-7080全自動新型鼓風干燥箱(上海智城分析儀器制造有限公司)；微量加樣器(Nichipet EX PLUS)；AB204-N電子讀數分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產品)；10cm培養皿、96孔培養板、凍存管(Corning)；普通手術器械；90-3磁力攪拌器(上海振捷實驗設備有限公司)；倒置顯微鏡(NIKON ECLIPSE TS100)；二氧化碳培養箱(STIK)；SORVALL ST16R Centrifuge高速低溫冷凍離心機(Thermo Fisher Scientific公司)。

2實驗方法

2.1小鼠子宮增重實驗

將小鼠按體重均衡和隨機的原則分組，持續給藥7天。正常組每日蒸餾水0.02mL/g灌胃；陽性對照組隔日灌胃戊酸雌二醇(0.33mg/kg/d)灌胃；腺苷0.5mg/10g/d，配成水溶液，每日按0.02mL/g灌胃。最后一次給藥24h后，摘眼球取血，脫頸椎處死小鼠，立即摘取子宮稱重，計算子宮系數[子宮濕重×(體重)^-1×100％]。實驗平行重復三次。結果與正常組相比，計算P值，考察有無統計學意義。

2.2MCF-7細胞增殖實驗

MCF-7細胞經含5％去雌激素胎牛血清的無酚紅DMEM培養基培養1周后，選取對數生長期細胞，PBS洗兩次，用0.05％胰蛋白酶消化后，加入無酚紅DMEM培養基吹打均勻，以2×10⁴個/mL的濃度接種于96孔板內，每孔培養總體積為200μL。培養24h待細胞貼壁后，換為腺苷培養液(5μM)繼續培養。37℃、5％CO₂培養48h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，37℃繼續培養4h，小心吸凈培養液，每孔加入150μLDMSO，震蕩5-10min，使紫色結晶完全溶解。用酶標儀在490nm下測定各孔吸光度值(A)，計算平均A值和細胞活力。實驗平行重復三次。

細胞活力＝各組OD值/正常組OD值

2.3ICI182,780拮抗實驗