[發明專利]超氧化物歧化酶基因及其編碼蛋白

有效

• 申請號: 201710626682.0
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN107217064B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 林峻
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/02
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

技術領域

本發明涉及生物基因領域，具體涉及一種超氧化物歧化酶基因及其編碼蛋白。

背景技術

超氧化物歧化酶Orgotein(Superoxide Dismutase，SOD)，別名肝蛋白、簡稱：SOD。它是生物體內重要的抗氧化酶，廣泛分布于各種生物體內，如動物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物體內清除自由基的首要物質。SOD在生物體內的水平高低是衰老與死亡的直觀指標?，F已證實，由氧自由基引發的疾病多達60多種。它可對抗與阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，并及時修復受損細胞，復原因自由基造成的細胞傷害。由于現代生活壓力，環境污染，各種輻射和超量運動都會造成氧自由基大量形成，因此，生物抗氧化機制中SOD的地位越來越重要。

超氧化物歧化酶按其所含金屬輔基不同可分為三種類型。第一種是含銅、鋅金屬輔基的SOD，稱為Cu.Zn—SOD，是最為常見的一種SOD酶，呈綠色，主要存在于機體細胞漿中；第二種是是含錳金屬輔基的SOD，稱為Mn—SOD，呈紫色，存在于真核細胞的線粒體和原核細胞內；第三種是含鐵金屬輔基的SOD，稱為Fe—SOD，呈黃褐色，存在于原核細胞中。

SOD具有抗衰老、免疫調節、調節血脂、抗輻射、美容等功能，在化妝品、食品、醫藥學、環境保護等領域具有重要的用途。但是，現有技術中的SOD由于在耐熱和抗凍融等方面存在缺陷，極大地限制了SOD的應用。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種超氧化物歧化酶基因及其編碼蛋白，該基因編碼的超氧化物歧化酶兼具良好的耐熱性和抗凍融性。

本發明所提供的超氧化物歧化酶基因(簡稱SOD基因)，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了上述超氧化物歧化酶基因所編碼的蛋白，其蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明所述SOD基因，是從福建省福州市閩侯縣收集的一份自然環境的水樣品中，通過宏基因組學技術，用試劑盒提取宏基因組DNA，并直接對提取好的DNA進行PCR擴增得到。

本發明SOD基因編碼的超氧化物歧化酶兼具良好的耐熱性和抗凍融性，能夠廣泛應用于化妝品、食品、醫藥學、環境保護等領域。

附圖說明

圖1為實施例1步驟1中PCR產物的電泳圖譜；

圖2為實施例1步驟6的電泳圖譜；上排1～6孔：左起：marker、樣品6～10；下排1～7孔：左起：marker、陰性對照、樣品1～5。

圖3為實施例2SOD活性檢測結果圖。

具體實施方式

以下結合附圖和實施例對本發明做進一步說明。以下未注明具體條件的實驗方法，按照本領域常規實驗條件或者制造廠商所建議的條件。

本發明所述超氧化物歧化酶基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

上述超氧化物歧化酶基因的編碼蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明所述SOD基因的來源，是從福建福州閩侯收集的一份自然環境的水樣品中，通過宏基因組學技術，用0.22微米的微孔濾膜，通過過濾，截留其中的各種生物，用試劑盒(Mobio牌，PowerDNA Isolation Kit，14900-50-NF，USA)提取宏基因組DNA，并直接對提取好的宏基因組DNA進行PCR擴增得到。

實施例1

通過分子克隆技術，構建SOD基因的蛋白表達載體

1、對提取好的宏基因組DNA做PCR擴增(50μl體系)

PCR體系如下：

Sodinfupet15F：GTTAGCAGCCGGATCCTATTTTATCTGGTTATACCGTCTCTCAACCTCC

Sodinfupet15R：ATATGCTCGAGGATCccATGAAGTTTAGAAGTATAATCCTTGCAGGGC

PCR程序設定如下：94℃預變性10min；(94℃變性30s，50℃退火30s，72℃延伸45s)，并設置30個循環；最后72℃延伸5min。

PCR產物采用瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定，結果如圖1所示，圖1左起第一個泳道是marker，第二個泳道是PCR產物，目的條帶位置如圖1所示。

本實施例所得PCR產物使用sanger法測序(ABI 3730xl測序儀雙向測序，測序引物為上述Sodinfupet15F和Sodinfupet15R，由廣州英駿生物公司完成)，得到本發明所述超氧化物歧化酶基因的的DNA序列，如SEQ ID NO.1所示。

2、膠回收