[發明專利]一種從發酵液中提取己二酸的方法

有效

• 申請號: 201710622975.1
• 申請日: 2017-07-27
• 公開（公告）號: CN107382706B
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發明（設計）人: 鄧禹;趙梅;毛銀;趙運英;盧偉強;陸春波
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07C51/42
• 分類號: C07C51/42;C07C51/43;C07C51/47;C07C51/48;C07C55/14;C12P7/44
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種從發酵液中提取己二酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)固液分離：發酵液去除菌體和雜質后，收集發酵液清液；

(2)超濾：利用超濾膜系統，將發酵液清液中的大分子蛋白及高分子雜質去除，收集超濾透過液；

(3)濃縮：濃縮超濾透過液；

(4)離子交換：將濃縮后的發酵液加入到經堿洗、去離子水洗、酸洗、去離子水洗至中性的陽離子交換樹脂中，攪拌均勻，使樹脂充分吸附后，過濾收集濾液；

(5)溶劑萃?。簩⑹占降臑V液使用酸調節pH至酸性，然后使用有機溶劑萃取，收集萃取液；

(6)蒸發：蒸發萃取液中的有機溶劑；

(7)結晶：將旋轉蒸發剩余的液體于4-8℃低溫結晶，結晶后，于20-40℃進行完全結晶，得到己二酸成品；

所述步驟(2)中超濾膜系統采用的超濾膜元件為卷式膜，超濾膜的截留分子量為500-3000；所述步驟(5)中的有機溶劑為乙醇、甲醇或乙酸乙酯；

所述步驟(1)中的發酵液中己二酸含量為10-30g/L；

所述步驟(1)中的發酵液是以重組大腸桿菌Mad2△atoB發酵得到；所述重組大腸桿菌Mad2△atoB是以敲除了atoB基因的大腸桿菌BL21(DE3)為宿主，分模塊過量表達來自褐色喜熱裂孢菌的異源基因β-酮硫解酶基因，3-羥?；?輔酶A脫氫酶基因，3-羥基己二酰脫氫酶基因，5-羧基-2-戊烯酰輔酶A還原酶基因，己二酰輔酶A合成酶基因片段Tfu_2576、Tfu_2577；其中，β-酮硫解酶基因、3-羥?；?輔酶A脫氫酶基因以pRSFDuet-1為表達載體；3-羥基己二酰脫氫酶基因、5-羧基-2-戊烯酰輔酶A還原酶基因以pTrc99a為表達載體；己二酰輔酶A合成酶基因片段Tfu_2576、Tfu_2577以pCDFDuet-1為表達載體。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(3)中濃縮是將超濾透過液濃縮至超濾液的60-90％。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(4)中的陽離子交換樹脂為732陽離子交換樹脂；陽離子交換樹脂的預處理方式為：首先用去離子水將陽離子交換樹脂清洗3次，后用NaOH調節pH至10，攪動半小時后，用去離子水沖洗直至pH中性后加H₂SO₄調節pH至1，然后再用去離子水沖洗至中性。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(4)中所述陽離子交換樹脂的活性基團為H⁺。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(5)中的有機溶劑的體積為濾液的2-4倍，萃取次數為3次。

6.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(6)中的蒸發是將有機溶劑蒸發至萃取液的10-20％。